[发明专利]一种同型半胱氨酸检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及到成分和检测方法，主要是针对于小分子的待检测物。基于小分子捕获技术研制生产同型半胱氨酸的检测方法，该方法使用基因突变酶与待测小分子物质结合，这种基因突变酶称为小分子捕获酶，这些经过突变、修饰的小分子捕获酶保留甚至增强其对底物或待测小分子物质的亲和力，但是削弱其对底物或待测小分子物质的亲和力的催化、分解能力。基于小分子捕获技术研制生产同型半胱氨酸(HCY)诊断试剂盒的方法提供这种，也提供突变的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶，特异性S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)捕获酶可以充分地保留甚至增强其对或S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)的亲和力，但是削弱了其对HCY或S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)的催化能力。

背景技术

检测物质的方法有广阔的应用范围。许多被检测物质包括一些小分子量的被检测物是生物体和生物运行过程的基本成分或是参与者。检测这些物质可用于监测生物体系及其反应过程或者用于诊断由于这些物质的不均衡或缺乏引起的肌体失调或疾病以及预后。例如，同型半胱氨酸Hcy，一个带硫基的氨基酸；叶酸，一种有机酸；胆固醇，一种对于诊断和预示广泛的心血管疾病有重要作用的脂类。维生素对于诊断和预示维生素缺乏或紊乱症是重要的。血糖，一种单糖，用于诊断和预示糖尿病的血糖水平。乙醇，监测滥用酒精和潜在的肝脏损伤。胆汁酸或胆盐是一种诊断和预示一些肿瘤如结肠癌的重要指标。监测尿酸是很重要的，因为异常高浓度的尿酸是诊断高尿酸血症导致痛风的指标，对肾脏有害。另外这种预示和诊断的应用，这种检测方法也适用于农业，工业或环境保护方面，监测目前的，特定区域的和被检测物的浓度。

同型半胱氨酸的检测

同型半胱氨酸是一种含硫基的氨基酸，来源于蛋氨酸通过S-腺苷蛋氨酸依赖的转甲基作用。细胞内的同型半胱氨酸再甲基化形成蛋氨酸或者进行一系列的分解代谢生成半胱氨酸。细胞内的同型半胱氨酸可以从细胞内溢出细胞外的液体中如血液和尿液中，大多数以氧化形势参加循环，多数与血浆中的蛋白结合(Refsumet al.，Annu.Rev.Medicine，49：31-62(1998))。血浆和尿中的同型半胱氨酸含量反应同型半胱氨酸的生成和利用平衡状态。这种平衡被破坏可能由于相关酶的遗传缺陷包括同型半胱氨酸转硫基和再甲基化的缺陷(例如胱硫醚β合成酶和N5，N10亚甲基四氢叶酸脱氢酶)或者同型半胱氨酸代谢需要的维生素饮食中缺乏(例如，维生素B6，B12和叶酸)(Baual，et al.，Cleveland Clinic Journal of Medicine，64：543-549(1997))。另外，血浆中的同型半胱氨酸水平同时受到一些治疗癌症或关节炎药物的影响例如抗叶酸药物甲基蝶呤(Foody，et al.，Clinician Reviews，8：203-210(1998))。

严重的高同型半胱氨酸血症由于同型半胱氨酸新陈代谢方面的基因编码出现了缺陷。这种情况中，这种酶的缺陷既包括HCY再甲基化中也包括转硫基的酶类，从而导致血中和尿中的Hcy升高至50倍。最严重的HCY代谢紊乱，先天性的高同型半胱氨酸血症由于缺乏遗传编码胱硫醚β合成酶的同合子。这些个体在早年时即出现血管栓塞，从而发生动脉硬化，心肌梗死，肾血管高压，间歇性跛行，肠系膜缺血和肺部栓塞。一些病人还存在智力缺陷和其它异常象器官异位和骨骼畸形(Perry T.，Homocysteine：Selected aspects in Nyham W.L.ed.Hertable disordersof amino acid metabolism.New York，John Wiley & Sons，pp.419-451(1974))。众所周知，孕妇体内含有高浓度的Hcy会导致婴儿出现神经管关闭不全(Scott et al.，″The etiology of neural tube defects″in Graham，I.，Refsum，H.，Rosenberg，I.H.，andUreland P.M.ed.″Homocysteine metabolism：from basic science to clinical medicine″Kluwer Academic Publishers，Boston，pp.133-136(1995))。因此，Hcy的诊断应用价值在临床上有很多好的文献。