[发明专利]一种高效诱导提取四种紫杉烷类化合物的方法

权利要求书

1.一种从红豆杉新鲜枝叶中高效诱导提取10-去乙酰基巴卡亭III、巴卡亭III、三尖杉宁碱和紫杉醇的方法，其主要特征在于：红豆杉新鲜枝叶经过鲜磨匀浆后，向体系中加入酶，通入氧气，诱导培养后将体系置于紫外线下照射数小时，过滤后的固形物用80％乙醇超声提取3次，提取液浓缩后依次经石油醚、三氯甲烷萃取，有机相浓缩至干后，加少许乙醇溶解后，倾入到大量水中，析出白色沉淀，为三尖杉宁碱与紫杉醇的粗品。水相经三氯甲烷萃取浓缩至干得10-去乙酰基巴卡亭III与巴卡亭III的粗品。

2.按照权利要求1所述的红豆杉新鲜枝叶，其特征在于：红豆杉新鲜枝叶主要来源包括东北红豆杉南方红豆杉。

3.按照权利要求1所述的鲜磨匀浆，其特征在于：植物中的大部分生物活性成分存在于细胞壁内，由于细胞壁的屏障作用，减慢了生物活性成分向提取溶剂中转移的速率。采用纯水鲜磨匀浆时，对植物枝叶的细胞壁起到破壁作用，加快了胞内物质向溶剂中的释放。

4.按照权利要求1所述的酶水解，其特征在于：所用的酶包括：淀粉酶和纤维素酶。在传统溶剂提取方法的基础上，利用酶反应具有高度专一性的特性，根据植物药材细胞壁的构成成分，选择相应的酶，将细胞壁的成分水解或降解，破坏细胞壁结构，使有效成分充分释放出来，溶解、混悬或胶溶于溶剂中，同时可使细胞内物质与纤维素、蛋白质、果胶和糖类之间结合的氢键断裂，使细胞内物质由结合态向游离态转化，从而达到了高效提取细胞内有效成分的目的。

5.按照权利要求1所述的通氧，其特征在于：通氧过程发生在加入酶之后，使氧气连续通入到酶转化体系中，在充分接触氧的环境中保持酶的最大活性，使两者对体系中经过匀浆鲜磨的红豆杉组织团块发生协同作用，共同促使体系中其他紫杉烷类物质向紫杉醇及其半合成前体物质转化。

6.按照权利要求1所述的紫外照射，其特征在于：紫外照射波长有254nm和365nm两种。将体系置于紫外线下进行充分照射，时间为7-8小时。紫外照射的主要作用是可以调节代谢过程中的某些酶活性，并能对某些关键酶在转录水平上进行调节，紫杉醇是二萜类化合物，与植物防卫系统对抗昆虫和病原菌侵袭产生植保素的合成路径有部分重叠，作为诱导子的紫外照射能够通过刺激植物防卫系统而促进紫杉醇的代谢。

7.按照权利要求1所述的液液萃取，其特征在于：除石油醚和三氯甲烷溶剂外还包括正己烷和二氯甲烷，萃取所用的溶剂量为体系的1/2，萃取次数为三次。石油醚或正己烷部分为杂质，回收溶剂后残渣弃掉。三氯甲烷或二氯甲烷部分为目标物。

8.按照权利要求1所述的有机相浓缩至干，乙醇溶解后，倾入水中，其特征在于：要用尽可能少的乙醇将浓缩物溶解，逐渐将其倾入到大量的水中，析出的固体经过滤得到，水相用三氯甲烷或二氯甲烷萃取(1/2)三次，合并后浓缩至干得固形物。