[发明专利]一种利用气升式生物反应器生产食用菌液体菌种的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用气升式生物反应器进行食用菌菌种液体培养，规模化生产食用菌液体菌种的方法。

背景技术

蘑菇类大型食用菌生产步骤可分为三步：制备菌种；制备栽培料并将菌种接入栽培料；出菇管理和收获。菌种制备又分为固体菌种制备和液体菌种制备。目前常用的菌种制备方法主要是固体菌种制备，其主要步骤为：斜面母种→固体原种→原种扩繁→栽培种。该方法在食用菌生产中已广泛应用，但缺点非常明显：1、制种时间长，从母种→栽培种需要150天时间；2、全部为手工操作，需要大量人工；3、占用设备和场地大，时间长。由于以上原因，固体菌种的制备一般由专门的菌种生产单位来完成，造成菌种生产与食用菌生产脱节，菌种成本过高，严重制约了食用菌生产的发展。

食用菌菌种的另一个制备方法为液体菌种制备。其主要步骤为：斜面母种→摇瓶液体菌种→发酵罐液体菌种，液体制种相对于固体制种有着明显的优势：1、制种时间短，整个制种周期仅需20-30天；2、用功省，用工量只及固体制种的1/20-1/10，占用场地很小；3、液体菌种的纯度高，菌龄一致，因而其菌袋的发菌时间可缩短1/3且出菇整齐，产品的质量好。液体制种方法必将取代固体制种方法，成为今后食用菌生产中制种技术的主要方法。

常规的食用菌液体制种主要设备是搅拌式发酵罐，它主要由发酵主罐、搅拌系统、供养系统、控温系统及其它分析检测系统组成。它的开发主要是为生物工程菌的发酵而设计的，目的是为了获得高附加值的基因工程产品，其操作技术要求高，设备投资大，因此，将它移置到食用菌液体菌种的生产是不合适的，该设备也没有真正在食用菌生产中得到推广应用。

由于蘑菇类食用菌大都是好氧真菌，生长需要充足的氧气供应。因此，相对于搅拌式发酵罐，气升式生物反应器是更好的液体制种设备。气升式生物反应器主要由主罐、空气发生及过滤系统、控温系统、pH控制系统、溶氧测定系统、消泡及蒸气消毒系统组成。它提供的氧气远较搅拌式发酵罐大，非常适于食用菌液体菌种的培养。但是气升式生物反应器是专门为植物细胞培养而设计的，目的是为了获得高附加值的细胞工程次生代谢产物，它的操作技术难度大，设备投资也很高。由于当前我国食用菌生产的主体是分散经营的个体种植户，他们没有足够的资金购买昂贵的设备，它们缺乏相关的技术知识，难以在生产中正确地使用和操作这些设备，因此，发酵罐和气升式生物反应器均不适用于我国食用菌生产的现状，气升式生物反应器在食用菌生产中的应用未见报道，正是由于这个原因，食用菌液体制种生产工艺至今没有得到普及和推广。市场急需的是面向个体菇农的，小型化的，操作简便、价格低廉的液体菌种生产设备。

本发明所提供的“简易气升式生物反应器”是利用中国专利ZL200420107291.6的气升式生物反应器，该反应器正是面向个体菇农户，实现小型化的，操作简便、价格低廉的液体菌种生产设备。目前食用菌菌种的液体培养已经非常成熟，先后有近百个食用菌品种的液体培养获得成功，但仅限于三角瓶的培养，本发明提供的是利用气升式生物反应器进行食用菌液体菌种生产方法。

发明内容

本发明目的在于，提供一种利用气升式生物反应器，规模化进行食用菌液体菌种生产的方法。该方法是将食用菌斜面菌种，在无菌条件下，接入一级菌种用气升式生物反应器内的液体培养基中，室温培养，形成一级液体菌种；将发酵完成的一级菌种，在无菌条件下，分接至二级菌种用气升式生物反应器的各单元液体培养基中，室温培养获得二级生产用液体菌种，在生产过程结束后，在无菌条件下，取出每瓶中的空气分布器及连接管，将罐上塑料盖盖好，即可用于食用菌生产。该方法操作简单，安全可靠，价格低廉，适用于个体菇农户使用，从而解决了个体菇农无法生产食用菌液体菌种的现状。

本发明所述的一种利用气升式生物反应器生产食用菌液体菌种的方法，按下列步骤进行：

a、取一支食用菌斜面菌种，在无菌条件下，取1-2cm²大小的菌块，接入一级菌种用气升式生物反应器内的液体培养基0.1-1.0％蛋白胨，0.1-1.0％酵母提取物，2-6％蔗糖，0.1-0.3％磷酸氢二钾，0.1-0.3％硫酸镁，10％小麦水，pH6.0-7.5中，加入消泡剂植物油7.5-20ml/瓶，室温培养10-15天，通气量0.8-1.2L/(min瓶)，形成一级液体菌种；