[发明专利]一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与积雪草苷B的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与积雪草苷B的方法。

背景技术

积雪草【Centella asiatica(L.)UrBan】为伞形科植物，植物学家林奈(Linnaeus，Carolus)于1764年将积雪草归入天胡荽属(Hydrocotyle)，并定名为Hydrocotyleasiatica L.。在1879年，德国人UrBan根据花瓣的排列以及果实的棱数将其从天胡荽属中的独立出来并建立积雪草属(Centella)，积雪草归入该属并更名为Centella asiatica(L.)Urb.。积雪草主要分布于南北半球热带和亚热带地区，主产地为南非、印度、斯里兰卡、马来西亚、印度尼西亚、澳大利亚、日本等，我国亦产积雪草。积雪草在中国的药用历史已达二千多年之久，民间常用于治疗感冒、扁桃腺炎、传染性肝炎、痢疾、跌打损伤、疔疮肿毒、外伤出血等。积雪草现代药理学研究和应用有了很大发展，表明积雪草可用于治疗抑郁症、皮肤创伤、胃溃疡、传染性肝炎、皮肤病和流行性脑脊髓膜炎等。

积雪草的化学成分复杂，主要有三萜类、黄酮类、挥发油类、多炔烯类等。其中三萜类化合物是主要的药效成分，包括积雪草苷、积雪草苷A、波热模苷、波热米苷、参枯尼苷、异参枯尼苷、积雪草酸、羟基积雪草波热米酸、马达积雪草酸等。积雪草总皂苷是从积雪草中提取得到的皂苷类物质的总称，主要由三萜苷类物质组成，其中代表性成分主要有积雪草苷(Aisaticoside，CAS No.：16830-15-2)、积雪草苷A(Asaiticoside A；Madecassoside，CAS No.：34540-22-2)和积雪草苷B(Asaiticoside B，CAS No.：125265-68-1)。积雪草苷A也叫羟基积雪草苷，积雪草苷B和积雪草苷A是一对同分异构体。积雪草苷A和积雪草苷B与积雪草苷相比多了一个羟基，极性差异较大，较易实现分离，但积雪草苷A和积雪草苷B的差异只在于其中一个甲基归属不同，且两个不同的归属处于邻位关系，这种差异在R基(Glu-Glu-Rha糖键)影响下显得更加微小，因此积雪草苷A和积雪草苷B的分离非常困难，目前尚无有效的方法报道。

积雪草苷(a)、积雪草苷A(b)与积雪草苷B(c)的结构式分别如下：

研究表明，积雪草苷A与积雪草苷B的混合物具有促进伤口愈合、抗皱、抗炎、抗抑郁、促进智力等药理作用。比较积雪草苷促进伤口愈合，治疗疤痕的药理作用可以发现，积雪草总皂苷的抗炎、抗抑郁、促进智力等药理作用可能是积雪草苷A与积雪草苷B起了主要作用。同时还有研究表明，不同浓度以及不同质量组成的积雪草苷A与积雪草苷B混合物的抗炎药理具有明显的差异，所以非常有必要分离得到积雪草苷A与积雪草苷B纯品，以进一步研究积雪草苷A与积雪草苷B的药理作用，为新药的开发提供基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与积雪草苷B的方法。

方法的步骤如下：

1)积雪草总皂苷用甲醇溶解后加入硅胶混合搅拌均匀，蒸干后得拌样硅胶，积雪草总皂苷与硅胶的质量比例为0.05～0.2∶1；

2)层析柱中依序加入硅胶和拌样硅胶，采用干法装柱，干法层析柱的高径比为3～9，硅胶与拌样硅胶的高度比为3～8；

3)以有机溶剂I-有机溶剂II-水三元混合溶剂为流动相，以0.5～3床层体积/h的流速洗脱；

4)洗脱液经TLC分析后合并成三个馏分，馏分1为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；

5)将馏分3真空浓缩、真空干燥后用乙腈-水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；

6)C18硅胶采用湿法装柱，柱子的高径比为4～12，用乙腈-水混合溶剂相冲洗柱子；

7)滤液按0.01～0.1g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/1g C18硅胶的比例上样，乙腈-水混合溶剂以0.5～3床层体积/h的流速洗脱；

8)洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分5为积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4与馏分6经真空浓缩、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B与积雪草苷A产品；

9)C18柱经乙腈-水混合溶剂冲洗再生后可再次上样。

所述步骤1)中以0.08～0.15g积雪草总皂苷/1g硅胶的比例加入硅胶搅拌均匀。

步骤3)中有机溶剂I为氯仿或二氯甲烷或乙酸乙酯。

步骤3)中有机溶剂II为甲醇或乙醇。