[发明专利]一种ZP120的固相合成方法

权利要求书

1.一种ZP120：Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH₂的固相合成方法，其特征在于所述方法包括如下顺序步骤：

(1)以Fmoc-Rink Amide-MBHA树脂为原料，进行程序反应，依次连接以下保护基：Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，得到Fmoc-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；

所述程序反应步骤如下：

①洗涤：用二氯甲烷和乙醇交替洗涤2～3次，二氯甲烷用量为5～7mL/g树脂，乙醇用量为5～7mL/g树脂；

②脱保护基：用20％的哌啶/DMF溶液室温下处理2～3次，每次20min，脱去Fmoc-保护基；

③洗涤：用二氯甲烷和乙醇交替洗涤2～3次，二氯甲烷用量为5～7mL/g树脂，乙醇用量为5～7mL/g树脂；

④连接保护基：加入1～5当量的Fmoc-保护氨基酸，1～5当量的HOBt，所述HOBt用二氯甲烷或二氯甲烷与N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液溶解，然后加入1～5当量的N，N-二异丙基碳二亚胺，搅拌，室温反应2～5小时；

⑤洗涤：用二氯甲烷和乙醇交替洗涤2～3次，二氯甲烷用量为5～7mL/g树脂，乙醇用量为5～7mL/g树脂；

(2)用20％的哌啶/DMF溶液室温处理，脱Fmoc-保护后得到H₂N-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；

(3)加入乙酸酐/DMF溶液酸化，乙酸酐加入量为50当量，室温反应2～5小时，得到Ac-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；

(4)用试剂K脱切侧链保护基和树脂，得到ZP120的TFA盐粗品；所述试剂K体积配比如下：TFA∶thioanisole∶H₂O∶phenol∶1，2-ethanethiol＝82.5∶5∶5∶5∶2.5；

(5)ZP120的TFA盐粗品用5％醋酸溶液溶解，过滤，滤液经C18键合硅胶装填的反相高效液相色谱柱纯化，水/乙腈梯度洗脱后冷冻干燥，得到ZP120的TFA盐；

(6)将ZP120的TFA盐用强碱型阴离子交换树脂脱去三氟醋酸根离子，冷冻干燥得到ZP120，方法如下：将ZP120的TFA盐溶于水中，上样，用水洗脱，收集洗脱液，合并洗脱液浓缩，冷冻干燥得ZP120。