[发明专利]一种ZP120的固相合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽类药物——ZP120的制备方法。属生物技术领域。

背景技术

ZP120化学名：乙酰-精氨酰-酪氨酰-酪氨酰-精氨酰-色氨酰-赖氨酰-赖氨酰-赖氨酰-赖氨酰-赖氨酰-赖氨酰-赖氨酰胺(Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2)

化学结构式为：

分子式：C₈₅H₁₄₁N₂₇O₁₅

分子量：1781.24

孤啡肽(nocieeptin或orphanin FQ)发现于1995年底，它是阿片受体样受体(ORL1或LC 132)的内源性配体，在痛觉调节、心血管系统、离子通道、依赖和耐受、学习和记忆等方面具有广泛的生物学活性。ZP120是一种利用SIP(Structure inducing probes)技术设计的NOP(Nociceptin/orphanin FQ peptidereceptor)受体的新型配体多肽。改构前的Ac-RYYRWK-NH2是从合成组合化学肽库中被NOP选择性筛选出来的六肽，ZP120增加了它的代谢稳定性。

美国专利US 7,244,701中有合成本品的报道：包括化学合成法和生物重组合成法，生物合成法是近年发展起来的新合成方法，但生物表达技术目前尚不成熟。同时，产品的纯化和产率方面离产业化生产尚有较大距离。报道的化学合成法包括：1，液相合成法(solution phase peptide synthese)，2，基于Merrifield-类型树脂的固相合成，包括Boc/Bzl和Fmoc/tBu策略。3，基于TentaGelResin(PEG-PS)类型树脂的固相合成，Fmoc/tBu策略。

液相合成法存在(1)反应步骤多，路线冗长。(2)中间体不易纯化分离，实际操作中溶剂蒸除难度较大。(3)目前试剂和所用氨基酸侧链保护基的来源和制备难度较大。

Merrifield类型树脂为载体，合成保护ZP 120树脂后，将肽从树脂上切下来所要求的条件比较苛刻，该方法采用HF裂解方式，必须拥有一台HF气体发生装置才能实现裂解，对于大量的肽树脂只能分两次裂解，生产规模受到限制。另外，HF是一种强腐蚀性的气体，一旦泄漏会对人造成极大的伤害。再者，此合成方法将肽从树脂上裂解下来后，抽去HF用稀乙酸抽提，抽提物经冷冻干燥后，生产周期长，成本高。

TentaGel Resin(PEG-PS)类型树脂目前成本较高，不适合于大批量的制备和工业化生产。

发明内容

本发明目的是提供一种操作简便，反应过程消旋化低、产品质量好、收率高的ZP120的合成方法。

本发明采用的技术方案是：

一种ZP120：Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH₂的固相合成方法，所述方法包括如下顺序步骤：

(1)以Fmoc-Rink Amide-MBHA树脂为原料，进行程序反应，依次连接以下保护基：Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，得到Fmoc-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；

所述程序反应步骤为：先用20％的哌啶/DMF溶液室温处理脱去Fmoc-保护基；再加入1～5当量的Fmoc-保护氨基酸、1～5当量的HOBt和1～5当量的N，N-二异丙基碳二亚胺，搅拌，室温反应2～5小时，连接Fmoc-保护氨基酸；所述HOBt用二氯甲烷或二氯甲烷与N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液溶解后加入；