[发明专利]一种彩色马蹄莲种质资源离体保存方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物种质资源保存及组织培养技术领域，尤其涉及一种彩色马蹄莲种质资源离体保存的方法。

背景技术

彩色马蹄莲(Zantedeschia hybrida)系天南星科(Araceae)马蹄莲属(Zantedeschia)多年生单子叶草本球根花卉，其形态高雅、色彩艳丽，在欧洲国家一直是切花中的佼佼者，盆花栽培也是一大消费渠道。近几年来也逐渐受到我国消费者的喜爱，种植面积正不断扩大。生产上彩色马蹄莲多为一年生栽培，通过球茎进行无性繁殖。彩色马蹄莲种质资源的繁殖和保存也主要依靠球茎为繁殖材料每年进行田间种植，这需要消耗大量的人力、物力和财力，而且彩色马蹄莲球茎本身很容易感染细菌性软腐病，通过多年的无性繁殖后很容易造成细菌、病毒等病虫害蔓延，造成资源损失，给种质资源的利用和保存带来难题。

当前，植物种质资源的保存方法主要有田间生长保存，离体低温保存、超低温保存，组织培养保存等方法。其中，常规田间种植保存中，存在因季节变换、病虫害等自然灾害的侵袭而造成工作量大和种质资源容易丢失；而超低温保存需要严格的保存条件，风险较大。植物离体保存因不受外界环境条件的影响，具有田间生长保存无法比拟的优点。对植物进行离体保存技术已多有报导，如专利申请号为CN200710019345和CN200710019346分别报导了通过减少培养基中大量元素和添加脱落酸进行菊花离体保存的方法，发明名称为“茅苍术组培繁殖的种质保存方法”，发明名称为“一种营养繁殖花卉石蒜的超低温保存方法”，等分别通过常温抑制生长，普通组织培养方式或超低温方式对植物进行了离体保存。但简单的运用以上保存方法并不适用于彩色马蹄莲，首先，彩色马蹄莲球茎本身很容易携带欧文氏菌(可导致细菌性软腐病)，尤其通常以带芽眼的切块为外植体，在快繁过程中随着培养代数的增加，此内生菌也大量繁殖蔓延，导致组培快繁无法继续；其次，该欧文氏菌系内生菌，若以常规的升汞表面消毒则达不到理想的防治效果，这对彩色马蹄莲的长期离体保存也是一个瓶茎问题；再次，在常规组培保存中必需对彩色马蹄莲种质资源进行频繁的继代培养(约每月继代一次)才能较好地保持其种性；此外，彩色马蹄莲球茎除携带欧文氏菌外，也往往携带有大量病毒，这在组培与离体保存中也是必须考虑的问题。

发明内容

本发明目的是，针对以往彩色马蹄莲常规组培离体保存中，一方面以种球带芽眼切块为外植体和常规的表面消毒，对球茎本身所携带的内生菌种一欧文氏菌，难以达到好的灭菌、脱菌的效果，另一方面在常规保存培养条件下需频繁继代培养所带来的大工作量等缺陷；提出一种成本低廉，操作简便，灭菌效果较好，保存期长达一年以上不需要频繁继代培养而仍能保持优良种性的彩色马蹄莲种质资源离体保存方法。

本发明目的通过以下技术方案来实现：

一种彩色马蹄莲种质资源离体保存方法，按如下步骤进行：

(1)培养基的配制：各阶段培养基组分和各组分在每升培养基内所含重量为：

A)基本培养基：其中，诱导、增殖培养基以蔗糖30g/L，琼脂7g/L的MS为基本培养基；生根培养基以蔗糖30g/L，琼脂7g/L的1/2MS为基本培养基；试管球茎膨大培养基以蔗糖40～50g/L，琼脂6g/L的MS为基本培养基；种质保存培养基以蔗糖20g/L，琼脂8g/L的1/2MS为基本培养基；pH均为5.6～5.8；

B)诱导培养基M1：MS+6-BA1.0-2.0mg/L+IBA0.3-0.5mg/L+青霉素50mg/L；

C)增殖培养基M2：MS+6-BA0.5-1.0mg/L+IBA0.1-0.5mg/L+青霉素100mg/L；

D)生根培养基M3：1/2MS+6-BA0.2-0.4mg/L+NAA0.5mg/L+Ac1g/L；

E)球茎膨大培养基M4：MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.5mg/L+Ac1g/L；

F)种质保存培养基M5：1/2MS+6-BA0.1-0.3mg/L+NAA0.1-0.4mg/L+甘露醇15.0-20.0g/L+青霉素100mg/L；