[发明专利]试剂、试剂盒及测定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种用于分析血小板的试剂、试剂盒及其方法。本发明还涉及一种分析血小板和网织红细胞用的试剂、试剂盒及其方法。

背景技术：

人的血液含有红细胞、白细胞、血小板等各种血细胞。其中血小板是直径2～3μm的无核细胞。正常人的血液中有15万～35万个/μl血小板。

但是，人们都知道，一旦患上特发性血小板减少性紫癜(IdiopathicThrombocytopenic Purpura：ITP)等血小板减少症和急性白血病等病症，血液中的血小板数就会减少。一般说来，血液中的血小板一旦低于10000个/μl，就要输血。因此，迅速、准确地测定血小板数在临床上是很重要的。

众所周知的血小板测定法之一是利用电阻抗法。此方法是测定含血小板的试样从两个电极间通过时的电阻脉冲，将其绘制成直方图进行分析。然而，利用电阻原理的方法有的标本得不到足够的测定精度。

因此，用对血小板表面抗原有特异性的标记抗体对血小板进行计数的方法应运而生(参照美国临床病理学杂志(2001)：115，p.460-464)。此文献的方法作为高精度的方法为人所知，但人们也知道，由于在测定中要使用抗原抗体反应，一般要得出结果需要花很长时间。因此，此方法作为判断是否要输血等需紧急作出判断的临床血小板测定方法不太适用。

另外，血液中含有网织红细胞。网织红细胞是骨髓中的晚幼红细胞脱核后刚释放到末梢血液中的尚未完全成熟的红细胞。网织红细胞的特点，比如有作为细胞成熟过程中的痕迹，其细胞内含有成熟红细胞已经不含的少量RNA、核糖体和线粒体等细胞小器官。

在临床检查领域，网织红细胞的分类和计数在把握患者的骨髓内造血状态上极为重要。骨髓造血功能正常的健康人其网织红细胞数占全红细胞的0.5～3.0％。对此，在骨髓造血异常的状态(比如骨髓造血功能受到限制的状态)下，网织红细胞数减少，在骨髓造血旺盛的状态下网织红细胞数增加。具体而言，在再生障碍性贫血和恶性肿瘤的化疗期间，网织红细胞数减少，而溶血性贫血等病症则网织红细胞数增加。

用流式细胞原理迅速测定血液中的细胞(即白细胞、网织红细胞和红细胞等血细胞)的方法已为人所知。作为这种测定方法，比如美国专利第6114173号中公开了全血试样中的网织红细胞、红细胞和血小板的计数和同定方法以及用于该方法的试剂组份。根据此文献公开的方法，将含阳离子型色素(特别是氧氮杂芑750)的试剂混合物与含网织红细胞的试样混合，再用流式细胞仪测定所得混合液的散射光和吸收光。以测得的散射光和荧光为参数对网织红细胞进行计数，并与红细胞和血小板区分开。

美国专利第4882284号公开了一种从红细胞和血小板中识别未溶解的全血中的白细胞的方法。据此文献记载，该文献中的方法是让含有吸收红色光的荧光染料的试剂与未溶解的全血接触。因为作为吸收红色光的荧光染料使用的氧氮染料能对白细胞染色，因此用流式细胞仪测定即可从红细胞和血小板中区分白细胞。

美国专利第5891731号公开了一种由至少能对一种网织红细胞特异性染色的色素和对白细胞特异性染色的色素组成的网织红细胞测定用试剂。该文献中也记述说氧氮类色素能对白细胞特异性染色。

血液中有时会出现破碎红细胞和脂质等。人们都知道，在血小板的测定中，由于出现在血液中的破碎红细胞和脂质等其大小与血小板类似，故会在测定时作为杂质影响血小板测定。特别是在测定需要输血的血小板低的标本时，这些杂质的影响会更大。然而，上述文献中没有关于降低这种杂质影响、提高血小板测定精度的记载。

由于上述原因，人们渴望开发出能够更明确地从其他血细胞和脂质粒子等血液中的杂质中区分出血小板加以测定的技术。

发明内容：

本发明的范围只由权利要求书所规定，其在任何程度上都不受这一节发明内容的陈述所限。

本发明提供一种在运用流式细胞技术的分析方法中能够明确地从其他血细胞和脂质粒子等血液中的杂质中区分出血小板并加以测定的试剂。

即，本发明提供一种血小板分析用试剂，该试剂中作为血小板染色用色素至少含有选自由卡布里蓝、尼罗蓝和灿烂甲酚蓝构成的组群中的一种色素。

所述的试剂还包括网织红细胞染色用第二色素，所述试剂可以分析血小板和网织红细胞。所述第二色素是能够对核酸染色的花青色素。

所述第二色素如结构式(I)所示：