[发明专利]一种检测活动性结核病和结核潜伏感染的试剂和方法

说明书

技术领域

本发明属生物医学检验领域，涉及微生物分子生物学检测方法，具体涉及一 种检测活动性结核病和结核潜伏感染的试剂和方法。

背景技术

结核病的病原体是结核杆菌，属于分枝杆菌属。结核病已成为当今的一个主 要的公共健康问题。据有关报道，全世界每年大约有800-1000万新发结核病例， 每年有200-300万人因此而失去生命，结核病是引起成年人死亡的头号传染病。 据WHO报道，全球三分之一的人口(约20亿)已感染了结核杆菌，如不采取措 施，近10年内还将有约3亿人受结核杆菌感染。据第四次全国流行病学调查显 示，我国受结核杆菌感染人数超过4亿，每年有13万人死于结核病，是全球22 个结核病高负担国家之一，结核病人数位居世界第二。

在全面实施直接督导治疗(DOTS)策略后，中国的结核发病率并没有如预期 地出现下降，这与潜在的大量未被诊断的潜伏感染以及痰菌阴性结核病人未被及 时诊断有关，这些感染者成为一个巨大的结核病源库，DOTS计划只能针对发病 的肺结核患者，而对于控制潜伏感染的病人或者痰菌阴性的症状不典型的患者没 有贡献。目前，发达国家已经充分注意到这一现象，在7年前甚至更早已经启动 对潜伏感染患者的干预。在美国，对高危人群进行结核潜伏感染的筛查是控制结 核的关键措施，自1993年以来结核发病率的下降和目前控制的水平都显示了公 共卫生工作的巨大成就，美国要达到在2010年消灭结核这一目标的前景也更为 乐观。美国的经验对于全球控制结核病是个有益的启示，特别是在DOTS计划得 到较好实施的中国，新的控制策略意义更为重大。全球结核控制的一项策略是在 高危人群中实施有效的筛查计划，这样可以鉴别出那些有潜伏感染的病人，通过 治疗他们来预防结核。而其中最突出的问题是如何准确迅速地发现潜伏感染者和 高危人群并加以控制。

目前诊断结核患者中主要采用的方法有：胸部X光片、涂片镜检、培养法、 TST皮试等。其中X光片无法早期及时发现；涂片法敏感性特异性差；培养法耗 时长，需要4-8周时间；TST皮试实验则特异性差，无法准确区分卡介苗(BCG) 接种者和结核病患者。

特异性抗原诊断一直是确认和评估病原体感染及感染状况较为可靠的方法， 且有早期诊断价值，已经在HBV、HCV、HIV等疾病的诊断方面获得了广泛的应用。 由于人体在对抗结核杆菌的感染中，细胞免疫起到了关键性的作用，所以寻找结 核杆菌特异性的T细胞抗原和检测T细胞免疫反应已经成为近年来研究的热点。国 际上已有报道的T-SPOT试剂正是使用结核杆菌的特异性抗原ESAT-6和CFP-10，以 Elispot方法诊断结核早期感染(专利号CN 1350546A)。

但是上述ESAT-6、Cfp-10抗原属于结核杆菌早期分泌蛋白，在结核持续感染 中分泌量减少，导致检测的敏感性不足，局限了该试剂的推广。另有研究显示 T-SPOT试剂在发展中国家的效果并不理想，推测可能与发展中国家非结核分枝杆 菌感染率高有关。另外，T-SPOT试剂价格昂贵，每一人份约合80美金，在发展中 国家难以推广。

随着结核杆菌全基因组测序的完成(S.T.Cole等Deciphering the biology of Mycobacterium tuberculosis from the complete genome sequence[J]. Nature.1998，393：537-544)，和结核分枝杆菌与BCG基因组的差异被揭示 (Molecular analysis of genetic differencesbetween Mycobacterium bovis BCG and virulent M-bovis JOURNAL OF BACTERIOLOGY 178(5)：1274-1282 MAR 1996)，基于基因组原理寻找结核杆菌特异抗原成为了现实。寻找新的结核杆菌 特异性抗原，并通过研究将其应用到结核感染的诊断中，引起了本领域研究人员 的关注。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测活动性结核病和结核潜伏感染的试剂。本发明 公开了一种新型的结核杆菌检测试剂，其含有SEQ ID1-2，4-5，8-28代表的蛋 白或多肽。它能有效地检测结核病和潜伏感染，同时它不受BCG疫苗的干扰。