[发明专利]一种含有丹参的药物制剂的鞣质的检测分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种含有丹参的药物制剂的鞣质的检测分析方法。

本发明含有丹参的药物制剂包括以丹参单味药制备的药物制剂，比如丹参注射液等制剂。

背景技术

鞣质(tannins)又称单宁，是存在于植物体内的一类结构比较复杂的多元酚类化合物。鞣质广泛存在于植物界，约70％以上的生药中含有鞣质类化合物，尤以在裸子植物及双子叶植物的杨柳科、山毛榉科、蓼科、蔷薇科、豆科、桃金娘科和茜草科中为多。鞣质存在于植物的皮、木、叶、根、果实等部位，树皮中尤为常见，某些虫瘿(galls)中含量特别多，如五倍子所含鞣质的量可高达70％以上。在正常生活的细胞中，鞣质仅存在于液泡中，不与原生质接触，大多呈游离状态存在，部分与其它物质(如生物碱类)结合而存在；鞣质具收敛性，内服可用于治疗胃肠道出血，溃疡和水泻等症；外用于创伤、灼伤，可使创伤后渗出物中蛋白质凝固，形成痂膜，可减少分泌和防止感染，鞣质能使创面的微血管收缩，有局部止血作用，鞣质能凝固微生物体内的原生质，故有抑菌作用，有些鞣质具抗病毒作用，如贯众能抑制多种流感病毒。鞣质可用作生物碱及某些重金属中毒时的解毒剂。鞣质具较强的还原性，可清除生物体内的超氧自由基，延缓衰老。此外，鞣质还有抗变态反应、抗炎、驱虫、降血压等作用。

鞣质虽然具有一定的药理作用，但由于其分子量较大、分子量不等，结构复杂，在水或乙醇中成胶体溶液，能够与蛋白质结合，生成不溶于水的沉淀，因此，在中药有些制剂中(水针剂、输液剂、粉针剂、滴眼剂等)，必须设法除尽，主要原因是鞣质能够产生很大的副作用，比如疼痛等(分析其原因，当含有鞣质制剂与肌肉接触后，鞣质与组织中的蛋白质结合成不溶性的鞣质蛋白，鞣质蛋白难于被吸收，因此造成疼痛、红肿及硬结等现象发生)。综上所述，建立准确、有效的鞣质的检测方法是非常必要的。

丹参为常用活血中药，临床上应用于心绞痛、冠心病等心血管疾病的治疗，试验证实丹参水溶性有效成分为其主要活性成分，其中含有丹酚酸A、B、C、D等13种缩酚酸类成分，丹参缩酚酸类成分均由丹参素与咖啡酸的衍生物聚合或酯化而成，为邻苯二羟基化合物，与鞣质的结构相似，与蛋清及明胶发生结合，使检查结果呈阳性，因此目前常规的检查方法：比如药典收载的鞣质检查方法、明胶氯化钠试液法、纸层析法、透析法、葡聚糖凝胶法等，都不适合于含丹参的制剂的鞣质的检测分析。所以，建立一种新的检测含丹参的药物制剂的鞣质的检测方法，是十分重要的。

发明内容

基于上述原因，我们科研人员经过长时间的创造性劳动，针对丹参中的鞣质和有效成分进行深入的分析，通过系列的劳动建立一种全新的检测鞣质的方法：鞣质均由多分子没食子酸缩合而成，经水解后可生成没食子酸，而丹参酚酸分子中不含没食子酸单元结构，经水解后无法生成没食子酸。因此设计试验，将丹酚酸A样品水解，检测样品经水解后产生的没食子酸的含量。若样品中不含鞣质，则无没食子酸的色谱斑点(或峰)出现，若有鞣质则样品经过水解将产生没食子酸的色谱斑点(或峰)，经过检测没食子酸的含量，即可达到测定样品中鞣质的含量的目的。本申请的鞣质的检测方法，比现有技术的检测分析方法灵敏度要高。

本申请通过以下技术方案实现的。

根据以上分析，设计了以没食子酸为对照，采用高效液相色谱法，以磷酸溶液和乙腈为流动相，对含有丹参的药物制剂进行制剂鞣质的检测分析。

其中含有丹参的药物制剂包括以丹参单味药制备的药物制剂。

其中磷酸溶液是磷酸与水体积比为1∶10000-4∶10000的溶液。

其中磷酸溶液是磷酸与水体积比为2.5∶10000的溶液。

其中检测分析方法为：

照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，ODS预柱，柱温35℃，检测波长为273nm，流动相为：0-10分钟，磷酸溶液比例为95％，乙腈比例为5％；

供试品水解溶液的制备：取样品，加入盐酸溶液，水浴中加热水解，放冷，水解液用滤纸滤过，滤液全部移入量瓶中，具塞锥形瓶及滤纸上的残渣用甲醇反复洗涤，洗涤液并入量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取续滤液置量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品水解溶液；

没食子酸对照品溶液的制备：取没食子酸对照品，加甲醇制成溶液，摇匀，滤过，作为没食子酸对照品溶液；

精密吸取以上各溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。