[发明专利]人与动物共患结核病荧光PCR快速诊断试剂盒

权利要求书

1.一组检验人与动物共患结核病的核苷酸序列，其特征在于：是序列表SEQ IDNo.1至序列表SEQ ID No.12所示的核苷酸序列，其中：

SEQ ID No.1和SEQ ID No.2为检验结核分枝杆菌的引物对，SEQ ID No.3为检验结核分枝杆菌的探针序列；

SEQ ID No.5和SEQ ID No.6为检验牛分枝杆菌的引物对，SEQ ID No.7为检验牛分枝杆菌的探针序列；

SEQ ID No.9和SEQ ID No.10为检验禽分枝杆菌的引物对，SEQ ID No.11为检验禽分枝杆菌的探针序列；

SEQ ID No.13和SEQ ID No.14为检验结核分枝杆菌复合群的引物对，SEQ IDNo.15为检验结核分枝杆菌复合群的探针序列。

2.根据权利要求1所述的一组检验人与动物共患结核病的核苷酸序列，其特征在于所述序列为：

(1)引物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所组成的引物对、SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2的互补序列，以及引物SEQ ID No.1向5’端延伸10个碱基的核酸序列，引物SEQID No.2向3’端延伸10个碱基的核酸序列，引物SEQ ID No.1和引物SEQ ID No.2扩增的核酸序列SEQ ID No.4，扩增序列SEQ ID No.4向5’端和3’端各延伸10个碱基的核酸序列以及各自的互补序列；

(2)引物SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所组成的引物对，SEQ ID No.5和SEQ IDNo.6的互补序列，以及引物SEQ ID No.5向5’端延伸10个碱基的核酸序列，引物SEQID No.6向3’端延伸10个碱基的核酸序列，引物SEQ ID No.5和引物SEQ ID No.6扩增的核酸序列SEQ ID No.8，扩增序列SEQ ID No.8向5’端和3’端各延伸10个碱基的核酸序列以及各自的互补序列；

(3)引物SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所组成的引物对，SEQ ID No.9和SEQ IDNo.10的互补序列，以及引物SEQ ID No.9向5’端延伸10个碱基的核酸序列，引物SEQ ID No.10向3’端延伸10个碱基的核酸序列，引物SEQ ID No.9和引物SEQ IDNo.10扩增的核酸序列SEQ ID No.12，扩增序列SEQ ID No.12向5’端和3’端各延伸10个碱基的核酸序列以及各自的互补序列；

(4)引物SEQ ID No.13和SEQ ID No.14所组成的引物对，SEQ ID No.13和SEQID No.14的互补序列，以及引物SEQ ID No.13向5’端延伸10个碱基的核酸序列，引物SEQ ID No.14向3’端延伸10个碱基的核酸序列，引物SEQ ID No.13和引物SEQ IDNo.14扩增的核酸序列SEQ ID No.16，扩增序列SEQ ID No.16向5’端和3’端各延伸10个碱基的核酸序列以及各自的互补序列；

(5)结核分枝杆菌的探针序列SEQ ID No.3，SEQ ID No.3的互补序列，以及探针的5’端和向上延伸10个碱基和3’端向下延伸10个碱基区域范围内得到的探针序列及其互补序列；

(6)牛分枝杆菌的探针序列SEQ ID No.7，SEQ ID No.7的互补序列，以及探针的5’端和向上延伸10个碱基和3’端向下延伸10个碱基区域范围内得到的探针序列及其互补序列；

(7)禽分枝杆菌的探针序列SEQ ID No.11，SEQ ID No.11的互补序列，以及探针的5’端和向上延伸10个碱基和3’端向下延伸10个碱基区域范围内得到的探针序列及其互补序列；

(4)结核分枝杆菌复合群的探针序列SEQ ID No.15，SEQ ID No.15的互补序列，以及探针的5’端和向上延伸10个碱基和3’端向下延伸10个碱基区域范围内得到的探针序列及其互补序列。

3.人与动物共患结核病荧光PCR快速诊断试剂盒，其特征在于包括：

1)4种PCR反应液，各含：1×PCR缓冲液；0.2μmol/L引物I；0.2μmol/L引物II，0.1μmol/L探针；200μmol/L d NTP，MgCl₂ 2.5mmol/L；

2)Taq酶2.5U/μl；

3)阴性对照：生理盐水

4)阳性对照：携带有扩增产物的质粒DNA

4种RT-PCR反应液分别为：结核分枝杆菌反应液、牛分枝杆菌反应液、禽分枝杆菌反应液和结核分枝杆菌复合群反应液；

结核分枝杆菌反应液中的引物I为SEQ ID No.1，引物II为SEQ ID No.2，探针为SEQ ID No.3；

牛分枝杆菌反应液中的引物I为SEQ ID No.5，引物II为SEQ ID No.6，探针为SEQ ID No.7；

禽分枝杆菌反应液中的引物I为SEQ ID No.9，引物II为SEQ ID No.10，探针为SEQ ID No.11；

结核分枝杆菌复合群反应液中的引物I为SEQ ID No.13，引物II为SEQ ID No.14，探针为SEQ ID No.15，

所述探针5’端标记FAM、HEX、TET、JOE、ROX或VIC等荧光染料，探针3’端标记TAMARA、Elcipse或BHQ淬灭标记。