[发明专利]人与动物共患结核病荧光PCR快速诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种人与动物共患结核病荧光PCR快速诊断试剂盒，更具体地说是针对引起人、畜、禽结核病的各种病原菌或病原菌复合群提供实时荧光PCR快速检测方法和诊断试剂，包括检测结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、禽分枝杆菌和结核分枝杆菌复合群的实时荧光PCR方法和试剂，属于生物技术领域。

背景技术

结核病是威胁人类及动物健康的重大传染病。世界卫生组织(WHO)专门发布了全球结核控制战略，并把每年的3月24号定为世界防治结核病日。结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex，MTC)是人及哺乳动物的结核病原菌，包括结核分枝杆菌(又称人型结核分枝杆菌，Mycobacterium tuberculosis，M.tuberculosis)，牛分枝杆菌(牛型结核分枝杆菌，Mycobacterium bovis，M.bovis)，卡介苗BCG(Mycobacterium bovis BCG，BCG)，非洲分枝杆菌(Mycobacterium africanum，M.africanum)和田鼠分枝杆菌(Mycobacterium microti，M.microti)。其中，结核分枝杆菌、牛分枝杆菌为主要的人畜结核致病菌。

人结核病主要由结核分枝杆菌(M.tuberculosis，又称人型结核分枝杆菌)引起。据统计，世界约1/3人口感染结核分枝杆菌，每年约300万人死于人结核。我国结核病患者数量位居世界第二位。结核分枝杆菌可感染牛、猪等动物，引起动物结核病，存在通过动物进一步扩大在人畜间传染的危险。

牛分枝杆菌(M.bovis，又称牛型结核分枝杆菌)是牛结核病的主要致病菌。牛分枝杆菌还可感染人、猪、猴、鹿等约50种温血动物和20多种禽类。牛结核病被世界动物卫生组织(OIE)列为B类疫病，是进出境动物重点检疫的疫病之一。据报道，牛结核病所造成的损失大于牛的其他各种疾病所造成的损失总和，每年牛结核病给世界造成的经济损失达30多亿美元。牛结核病在世界各国均有发生，在我国依然是最常见的多发性疾病。发达国家纷纷制定牛结核病根除计划，我国也由政府组织每年春、秋季开展牛结核防疫工作。

牛分枝杆菌和结核分枝杆菌感染人类或动物引起的结核病变临床不能区分。调查表明，牛群中的牛结核感染与人群中结核病发病有直接关联，特别是在未执行牛结核根除计划的发展中国家。牛分枝杆菌传播感染人类造成公共卫生难题。由牛分枝杆菌感染引起的人肺结核可达5％-10％以上。WHO专家委员会曾指出：“除非扑灭牛结核病，否则人类结核病的控制不会成功”。此外，艾滋病患者合并感染牛分枝杆菌的情况正得到愈来愈多的关注。另一方面，由于牛分枝杆菌可通过牛奶排出，奶制品中牛分枝杆菌的污染及其与人肺结核的关联在发达国家早已得到重视，并采取针对性措施。

禽结核病主要在家禽中发生，被OIE列为B类疫病，被我国列为三类动物疫病。该病由禽分枝杆菌(Mycobacterium avium，M.avium，又称鸟分枝杆菌，禽型结核分枝杆菌)引起。禽分枝杆菌还可感染猪、牛等大动物，除危害家畜健康，其感染还干扰牛结核菌素皮试(PPD)结果，造成假阳性，影响牛结核病防治、根除及进出境动物检疫。

禽分枝杆菌、副结核分枝杆菌均属禽分枝杆菌复合群(Mycobacterium aviumcomplex，MAC)。该群除上述两种病原菌外，还包括胞内分枝杆菌(Mycobacteriumintracellulare)和瘰疬分枝杆菌(Mycobacterium scrofulaceum)。近年来，MAC在人群中的感染呈上升趋势，众多的临床实例表明MAC是与艾滋病合并感染的主要非结核分枝杆菌。

综上所述，人及动物的结核、副结核病涉及多种病原菌，它们均属分枝杆菌属，结构相似，抗原性有交叉，常规方法难于鉴别。针对相关病原菌或病原菌复合群建立可靠的鉴别、鉴定技术，是有效防控和诊治结核、副结核病的重要技术保障，对于公共卫生，养殖业健康发展、动物进出口贸易以及奶制品食品安全均具有重要意义。

目前国内外用于诊断结核病的检验方法，大体上可分为3类：第一类是细菌学检验方法，如染色镜检、细菌培养和动物接种等；第二类是采用免疫学方法检测结核菌的特异性抗体，如皮内变态反应、酶联免疫吸附试验(ELISA)和补体结合试验(CF)方法等；第三类是采用分子生物学检验方法，如PCR-RFLP、PCR-核酸探针、多重PCR等。