[发明专利]一步三重RT－PCR快速检测百合三种病毒的方法无效
| 申请号： | 200710178693.3 | 申请日： | 2007-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN101220396A | 公开（公告）日： | 2008-07-16 |
| 发明（设计）人： | 明军;徐榕雪;刘春;穆鼎;汤庚国;王晓武;刘博 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司 | 代理人： | 张涛 |
| 地址： | 100081北京市中关村南*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一步 三重 rt pcr 快速 检测 百合 病毒 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一步三重RT-PCR快速检测百合三种病毒的方法，包括cDNA的合成与三重RT-PCR扩增步骤，其特征在于，所述三重RT-PCR扩增体系中含有下列三对引物：
CMV1：5’-ATGGACAAATCTGAATCAACCAG，
CMV2：5’-TCAGACTGGGAGCACTCCG；
LSV1：5’-ATGCAATCAAGACCAGCACAAG，
LSV2：5’-TTTGTGTATCGATGATTTCGG；
LMoV1：5’-GCAAATGAGACACTTAACGCT，
LMoV1：5’-CATAGAAATTCCAAGTAAGGGG..
2.根据权利要求1所述的方法，所述RT-PCR扩增条件为：30个循环，72℃延伸5min，最后于4℃结束。
3.根据权利要求1所述的方法，所述RT-PCR扩增体系中加入的是总RNA提取物，cDNA的合成与三重RT-PCR扩增体系是一步完成的。
4.根据权利要求3所述的方法，所述cDNA的合成条件为：42℃下反转录30min，95℃4min，94℃20s，52℃30s，72℃40s，72℃5min，30个循环。
5.根据权利要求1所述的方法，所述该方法中还包括假阳性检测步骤。
6.根据权利要求5所述的方法，所述假阳性检测是将PCR产物回收、纯化、重组质粒、PCR鉴定、再经序列比对确定。
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