[发明专利]一种纯化金丝桃素的方法

权利要求书

1.一种金丝桃素的纯化工艺，其特征在于该工艺包括如下步骤：

A、提取和富集：取研碎的贯叶连翘药材，用溶剂通过回流、渗漉、浸渍或用超声提取法提取；合并提取液，在20～60℃下减压回收溶剂，加水和乙醇稀释至药材重量的3～10倍，并调至含醇量为10％～55％，混匀，离心，得上清液；用95％乙醇浸泡大孔吸附树脂24h后装柱，以95％乙醇洗柱，至流出液加水不再浑浊为止；蒸馏水洗至无醇味；上清液过以上大孔吸附树脂，树脂量为上清液体积的1/8～1/3，树脂吸附饱和后停止上样；用1～2倍树脂体积的水洗脱，弃去水洗液；用浓度低于55％的乙醇洗脱，洗脱液弃去；再用60％～90％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至与原料药材的重量比例为1∶0.5～3；

B、结晶：将浓盐酸加至浓缩液中使盐酸含量达到1％～5％，于4～5℃冰箱中冷藏放置后粗制金丝桃素即呈黑色粉末状沉淀析出；干燥；

C、凝胶柱层析：以上干燥的粗制金丝桃素沉淀以甲醇或吡啶∶甲醇＝4-6∶94-96的溶液溶解，过滤除去不溶物，过凝胶柱分离；以甲醇或甲醇∶水＝5-10∶1的溶液或乙酸乙酯∶甲醇＝1∶3-7的溶液为洗脱溶剂，收集其中金丝桃素流分；流分用TLC检识：薄层板为硅胶G板，展开剂为二氯甲烷∶丙酮∶甲醇＝50～75∶10～15∶5～10，在365nm紫外灯下趁湿观察，合并相同的组分；

D、C₁₈柱层析：C₁₈柱层析所用的填料为不定形或球形的十八烷基键合相硅胶，粒径为50μm或100μm；用超声法、减压抽滤法或通入N₂法或这几种方法的结合脱气，除去洗脱溶剂中的氧气；上述凝胶柱分离的组分以3～5倍量体积的甲醇溶解，上C₁₈柱；以甲醇∶水＝1-19∶1的溶液为洗脱溶剂，溶剂洗脱过程中通入N₂，收集其中金丝桃素流分；流分用TLC检识：薄层板为硅胶G板，展开剂为二氯甲烷∶丙酮∶甲醇＝50～75∶10～15∶5～10，在365nm紫外灯下趁湿观察，合并相同的流分；

E、冷冻干燥：将以上收集的流出液于20℃～60℃下减压回收溶剂，剩余溶液置超低温冰箱中冷冻10h以上，冷冻干燥，得金丝桃素冻干粉。

2.如权利要求1所述的纯化工艺，其特征在于该工艺包括如下步骤：

A、提取和富集：取研碎的贯叶连翘药材，用溶剂通过回流、渗漉、浸渍或用超声提取法提取；合并提取液，40℃减压回收溶剂，加水和乙醇稀释至药材重量的4～5倍，并调至含醇量为30％，混匀，离心，得上清液；用95％乙醇浸泡大孔吸附树脂24h后装柱，以95％乙醇洗柱，至流出液加水不再浑浊为止；蒸馏水洗至无醇味；上清液过以上处理好的大孔吸附树脂，树脂量为上清液体积的1/6～1/4，树脂吸附饱和后停止上样；用1～2倍树脂体积的水洗脱，弃去水洗液；用浓度低于55％的乙醇洗脱，洗脱液弃去；再用80％乙醇洗脱金丝桃素，收集洗脱液浓缩至与原料药材的重量比例为1∶1；

B、结晶：将浓盐酸加至浓缩液中使盐酸含量达到3％，于4～5℃冰箱中冷藏放置后粗制金丝桃素即呈黑色粉末状沉淀析出；

C、凝胶柱层析：以上干燥的粗制金丝桃素沉淀以甲醇或吡啶∶甲醇＝5∶95的溶液溶解，过滤除去不溶物，行凝胶柱分离；以甲醇或乙酸乙酯∶甲醇＝1∶5的溶液为洗脱溶剂，收集其中金丝桃素流分；流分用TLC检识：所用薄层板为硅胶G板，展开剂为二氯甲烷∶丙酮∶甲醇＝75∶15∶10，在365nm紫外灯下趁湿观察，合并相同的组分；

D、C₁₈柱层析：C₁₈柱层析所用的填料为球形的十八烷基键合相硅胶，粒径为50μm；用超声法、减压抽滤法、通入N₂法或这几种方法的结合脱气，除去洗脱溶剂中的氧气，上述凝胶柱分离的组分以3～5倍量体积的甲醇溶解，上C₁₈柱；以甲醇∶水＝70∶30-80∶20混合溶液为洗脱溶剂，溶剂洗脱过程中通入N₂，收集其中金丝桃素流分；所用薄层板为硅胶G板，展开剂为二氯甲烷∶丙酮∶甲醇＝75∶15∶10，在365nm紫外灯下趁湿观察，合并相同的组分；

E、冷冻干燥：将以上收集的制备流出液40℃减压回收溶剂，剩余溶液置超低温冰箱中冷冻10h以上，以真空冷冻干燥机冷冻干燥，得金丝桃素冻干粉。

3.如权利要求1或2所述的纯化工艺，其特征在于贯叶连翘药材用天然金丝桃属植物贯叶连翘带花的地上部分、粗提物或花代替。