[发明专利]一种纯化金丝桃素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种金丝桃素的纯化工艺，特别涉及一种从金丝桃属植物贯叶连翘及含金丝桃素的其它植物或由上述植物的粗提物中纯化得到的金丝桃素冻干粉的纯化工艺。

背景技术

金丝桃素(Hypericin)是金丝桃属植物贯叶连翘(Hypericum PerforatumL.)、和含金丝桃素的其它植物中抗抑郁的有效成分之一。

金丝桃素是苯并二蒽酮类成分，即4，4’，5，5’，7，7’-六羟基-2，2’-二甲基-中位苯并二蒽酮。分子式是C₃₀H₁₆O₈，分子量为504.43。蓝黑色针状结晶，易溶于吡啶和其它有机胺类呈橙红色并带红色荧光，溶于碱水溶液，几乎不溶于其它有机溶剂。在低于pH11.5时呈红色溶液，高于pH11.5时为绿色溶液而带红色荧光。金丝桃素在植物中含量很低0.01～0.05％，且稳定性差，加热易分解，没有固定的熔点。60℃超过六周，粉末提取物、药片、液状提取物中金丝桃素都显著下降。金丝桃素在光照、酸、碱、高温条件下不稳定，提取分离和保存时需避光、减少与酸碱接触、避免高温加热。

金丝桃素的衍生物包括伪金丝桃素(pseudohypericin)和一些前体物质，如原金丝桃素(protohypericin)、原伪金丝桃素(protopseudohypericin)。

1)R＝CH₃金丝桃素hypericin               3)R＝CH₃原金丝桃素protohypericin

2)R＝CH₂OH伪金丝桃素pseudohypericin     4)R＝CH₂OH原伪金丝桃素protopseudohypericin

目前文献报道的纯化方法有四类，我们通过大量实验验证以上方法时发现：吡啶-20％盐酸/甲醇重结晶的方法得到的是金丝桃素和伪金丝桃素的混合物，而不是金丝桃素单体，如果反复使用该方法重结晶，会导致样品严重分解，得率越来越低；硅胶柱层析方法得到的产物含有大量多元醇等脂肪链成分，NMR谱图上有大量杂峰，且金丝桃素与硅胶填料发生较强吸附，造成样品洗脱峰严重脱尾，降低了含量和得率；凝胶法Sephadex LH-20不能很好地分离金丝桃素和伪金丝桃素，在所接收的流出液里总是有伪金丝桃素存在；大孔树脂分离法^[8，9]可以富集苯并二蒽酮类成分，但无法分离金丝桃素和伪金丝桃素，同样得不到单体。金丝桃素和伪金丝桃素在结构非常相似，仅在一个碳上连接的基团有差别，金丝桃素连接-CH3，伪金丝桃素连接-CH2OH。现有方法未能有效分离这两种成分。

发明内容

本发明的目的在于提供一种金丝桃素的纯化工艺。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明金丝桃素的提取、分离、纯化工艺如下：

A、提取和富集：取研碎的贯叶连翘药材，用溶剂通过回流、渗漉、浸渍、超声提取或用连续提取法提取；合并提取液，在20～60℃下减压回收溶剂，加水和乙醇稀释至药材重量的3～10倍，并调至含醇量为10％～55％，混匀，离心，得上清液；用95％乙醇浸泡大孔吸附树脂24h后装柱，以95％乙醇洗柱，至流出液加水不再浑浊为止；蒸馏水洗至无醇味；上清液过以上大孔吸附树脂，树脂量为上清液体积的1/8～1/3，树脂吸附饱和后停止上样；用1～2倍树脂体积的水洗脱，弃去水洗液；用浓度低于55％的乙醇洗脱，洗脱液弃去；再用60％～90％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至与原料药材的重量比例为1∶0.5～3；

B、结晶：将浓盐酸加至浓缩液中使盐酸含量达到1％～5％，于4～5℃冰箱中冷藏放置后粗制金丝桃素即呈黑色粉末状沉淀析出；干燥；

C、凝胶柱层析：以上干燥的粗制金丝桃素沉淀以甲醇或吡啶∶甲醇＝4-6∶94-96的溶液溶解，过滤除去不溶物，过凝胶柱分离；以甲醇或甲醇∶水＝5-10∶1的溶液或乙酸乙酯∶甲醇＝1∶3-7的溶液为洗脱溶剂，收集其中金丝桃素流分；流分用TLC检识：薄层板为硅胶G板，展开剂为二氯甲烷∶丙酮∶甲醇＝50～75∶10～15∶5～10，在365nm紫外灯下趁湿观察，合并相同的组分；