[发明专利]降糖药—伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测定方法

说明书

技术领域

本发明属于药物新技术领域，涉及一种用于治疗糖尿病的药物伏格列波糖及其制剂的分析测定方法，具体地说是一种用高效液相色谱方法，采用紫外检测器，利用末段吸收，选用适当的流动相，对治疗糖尿病的药物伏格列波糖及其制剂进行分析测定，比目前国家标准采用柱后衍生法测定伏格列波糖的方法即简单又重复性好，准确度更高。

背景技术

伏格列波糖片是日本武田药品工业株式会社开发研制的α-葡萄糖苷酶抑制剂类将血糖药，因其用量小，能有效控制血糖，是对糖尿病有效性及安全性很高的一种新型药物。其结构式如下：

伏格列波糖结构式

根据文献报道及国家药品标准，测定伏格列波糖片的方法有：

(1)原日本方法：有关物质方法采用戊乙烯乌托品柱，含量测定采用氨丙基键合球形硅胶柱，分别采用两种流动相，利用柱后衍生的方法，用荧光检测器检测进行测定。

(2)国家药品标准收载制剂方法：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以不同浓度辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液(pH3.5)为流动相，利用柱后衍生的方法，用荧光检测器检测进行测定。

(3)国家药品标准收载原料方法：采用氨基硅烷健合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈-磷酸盐(pH5.8)(取磷酸二氢钠二水合物1.56g，加水500ml使溶解，得溶液A；取磷酸氢二钠十二水合物3.52g，加水500ml使溶解，得溶液B，用溶液B调节溶液A的Ph为5.8)(60：40)为流动相，荧光监测器，柱后衍生。

以上三种方法均采用柱后衍生的方法，用荧光检测器检测进行测定。该方法存在操作烦琐，需要采用双泵，20米长的聚四氟乙烯反应管(内径0.5mm)，反应温度100℃，2米长聚四氟乙烯冷却管(内径0.3mm)，冷却温度15℃。操作起来受各种因素的影响，比如：反应管温度、反应管内径的大小、室温、冷却管温度、冷却管内径的大小，荧光试剂的配置及浓度，荧光试剂的纯度(色谱纯或分析纯)，流动相的配比，流动相与荧光液的流速比等等。造成重现性差，并且不同的人员用同一台仪器，操作测定的图谱差异性很大，同一个人用不同的仪器测定的图谱差异性也很大。同时我们在操作过程中发现，反应管非常容易破裂；理论塔板数比较低，大约2000以下，与标准规定的4500相差较大。

因此，寻求一种比较稳定、重现性和重复性比较好，又比较常用和容易实现的测定方法，用于该药物的分析测定，是非常有必要和有价值的。为严格控制药物的质量，提高药物的安全性，起到非常重要的作用，也能体现出很好的社会效应。我们经过了大量的筛选工作，最后摸索出一套适合伏格列波糖及其制剂的分析测定方法。采用确定的方法进行检测，有关物质图谱的理论踏板数以伏格列波糖峰计约为9000，含量测定和溶出度图谱的理论踏板数以伏格列波糖峰计约为13000。对称度均约为1.1。该方法快速简便，精密度高，分离效果好，结果准确，重复性试验及回收率试验的RSD均小于2.0％，有关物质最低检出量(s/n＝3)为0.05ug/ml，相当于测定浓度的0.02％。

发明内容

本发明目的在于提供一种稳定性好、成本低、重现性好、重复性好，操作简单，理论塔板数高，用于伏格列波糖及其制剂的分析测定方法。应用该方法测定治疗糖尿病的药物伏格列波糖及其制剂，方便可行，准确度高。

一种用于治疗糖尿病的药物伏格列波糖及其制剂的分析测定方法，是通过以下技术方案实现的：

仪器：一套简单高效液相色谱仪，包括液相泵、紫外检测器、200ul进样阀

试剂：磷酸二氢钠或其水合物(分析纯)、磷酸氢二钠或其水合物(分析纯)、乙腈(色谱纯)

色谱柱：氨基硅烷键合硅胶为填充剂

流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液(75：25)

灵敏度：0.0025AUFS～0.0050AUFS

检测波长：195nm～200nm

磷酸盐缓冲液的配制：取磷酸二氢钠二水合物0.624g，磷酸氢二钠十二水合物0.350g，加水溶解并稀释至1000ml。

溶出度方法的选择：由于伏格列波糖制剂的规格为0.2mg，用水做溶剂，直接进样其溶剂水对伏格列波糖主峰有影响，采用乙腈稀释，使进样时的溶剂中的比例接近流动相的配比，消除溶剂对主峰的影响。稀释至大约为溶出时的三倍，造成检测溶液浓度更低。因此采用增加溶出度测定时的主药度，取样品2片或2粒，测定波长为195nm。