[发明专利]一种氨基酸生物拆分的新方法

权利要求书

1.一种氨基酸生物拆分的新方法，其特征在于，它包括以下步骤：

①以米曲霉菌Aspergillus Oyzae Lb3085为菌种，以葡萄糖0.5～4％、豆浆30～65％、玉米浆0.2～3.5％、硫酸镁0.05-0.3％、磷酸氢二钾0.2％为培养基，在21～38℃、pH6.5～8.2左右的条件下发酵15～40h，过滤得湿菌体，冰冻保存；

②在烧瓶中依次加入去离子水、湿菌体、0.03-0.10mol/L Mn+2或Co+2或Zn+2溶液和底物及助溶剂，于18～48℃条件下搅拌反应6～15h，控制溶液的pH6.5-8.2，底物与湿菌体的质量比为1∶2～8；

③过滤除掉废菌体，调pH至3.0～5.0，乙酸乙酯萃取，水溶液用离子交换树脂处理，洗脱液蒸发浓缩，即可获得对应L-氨基酸；

④有机相浓缩回收溶剂后，残余物溶于甲醇，与2M的盐酸一起加热，升温至58～86℃，反应2h，得澄清溶液，调pH至3.8～6.2，浓缩回收甲醇，冷却、过滤即得D-氨基酸；

所述底物为DL-N-乙酰化氨基酸酯；所述助溶剂有1，4-二氧六环、二甲亚砜等，加入的量与去离子水的体积比为1∶6～15；所述的湿菌体含水量一般在13～35％；

所述的二价的锰盐、钴盐和锌盐通常为氯化物、溴化物、硫酸盐、硝酸盐、醋酸盐等。

2.如权利要求1所述的一种氨基酸生物拆分的新方法，其特征在于，所述底物为DL-N-乙酰化氨基酸酯，以米曲霉菌Aspergillus Oyzae Lb3085发酵产生的包含有酰胺水解酶和酯水解酶的菌体为催化剂完成的。

3.如权利要求1所述的一种氨基酸生物拆分的新方法，其特征在于，

所述DL-N-乙酰化氨基酸酯包括邻、对、间卤代、烷基、硝基、氨基、羟基、酰基、羧基、磺酰基、烷氧基、酰氧基、烷氨基、酰氨基等单取代、二取代、三取代DL-N-乙酰苯丙氨酸甲酯。

4.如权利要求1所述的一种氨基酸生物拆分的新方法，其特征在于，所述DL-N-乙酰化氨基酸酯还包括DL-N-乙酰萘丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰噻吩丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰呋喃丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰吡咯丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰噻唑丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰噁唑丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰吡唑丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰组氨酸甲酯、DL-N-乙酰吡啶丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰嘧啶丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰哒嗪丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰吡嗪丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰喹啉丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰异喹啉丙氨酸甲酯、DL-N-乙酰色氨酸甲酯等芳基丙氨酸酯。

5.如权利要求1所述的一种氨基酸生物拆分的新方法，其特征在于，所述DL-N-乙酰化氨基酸酯还包括DL-N-乙酰-β-氨基酸、DL-N-乙酰-γ-氨基酸和DL-N-乙酰-δ-氨基酸。

6.所述DL-N-乙酰化氨基酸酯还包括其他或含有官能团或不含有官能团的DL-N-乙酰脂肪基氨基酸酯。

7.如权利要求1所述的一种氨基酸生物拆分的新方法，其特征在于，所述的L-氨基酸为L-苯丙氨酸，所述的D-氨基酸为D-苯丙氨酸，其拆分水解方法包括以下步骤：

①在500mL锥形瓶中，接入米曲霉菌Aspergillus Oyzae Lb3085，选培养基配方为葡萄糖2％、豆浆35％、玉米浆2.3％、硫酸镁0.1％、磷酸氢二钾0.2％，pH为6.8，温度34℃条件下摇床(280r/min)上发酵37h，过滤得湿菌体，冰冻保存；

②在500mL烧瓶中依次加入200mL去离子水、18g湿菌体、2mL0.05mol/L MnCl2溶液和溶解20mmol DL-N-乙酰苯丙氨酸甲酯的10mLdioxane溶液，于35℃下，在转速为200r/min的摇床上反应10h，反应过程中，控制pH在7.5左右；

③过滤除掉菌体，调pH至4.0，50mL乙酸乙酯萃取3次，水溶液用离子交换树脂处理，pH＝9.5上柱，pH＝2.0盐酸溶液洗脱，洗脱液蒸发浓缩至10mL，加少量乙醇即有白色固体析出，养晶4h，过滤得L-苯丙氨酸；

④乙酸乙酯溶液浓缩，回收乙酸乙酯，残余物溶于10mL甲醇和20mL2M的盐酸溶液中，加热升温至68℃，反应2h，调pH至4.5，浓缩回收甲醇，水溶液用与所述步骤③同样的树脂方法处理，即得D-苯丙氨酸。