[发明专利]一种从蛋清中提取溶菌酶的方法

说明书

技术领域

本发明是关于一种溶菌酶的提取方法，更具体地说，是关于一种从蛋清中提取溶菌酶的方法。

背景技术

溶菌酶的分子量为14388，为由129个氨基酶组成的碱性球蛋白，是一种稳定的天然蛋白质，在鸡蛋蛋清中含量最丰富，它的含量约占蛋清的3.5-4重量％，还有96重量％左右的蛋白质无溶菌活性而称为杂蛋白。溶菌酶是一种国内外很紧俏的生化物质，广泛用于医药、化工、食品等行业。溶菌酶的生产一般以鸡蛋清为原料，工业上常用直接结晶法和离子交换法、超滤法、亲和色谱法、反胶团萃取、亲和膜色谱、扩张床吸附等技术从蛋清中提取溶菌酶。虽然有些方法，如采用离子树脂进行洗脱的方法能够得到较高产率的溶菌酶，但同时蛋清中的大部分蛋白质被破坏，无法应用在蛋白粉的生产工艺中。

针对不破坏蛋清中蛋白而从蛋清中提取高附加值的溶菌酶的众多分离纯化方法中，膜分离的方法，特别是超滤法因操作简单、费用低、产品不易失活、无相变等优点而备受青睐。然而，新鲜蛋清中含有大量的大分子蛋白，且分浓厚蛋白和稀薄蛋白两部分，未经处理的蛋清为高粘度不均一的体系，无法直接将新鲜蛋清进行膜分离，而需要在进行膜分离之前先降低蛋清的粘度。

降低蛋清粘度并使蛋清液达到均一状态的操作方法有很多，如高速搅拌、稀释等方法。在采用高速搅拌分散蛋清的时候，由于转心处的温度上升很快，导致接近转心的蛋白会很快变质变性，势必会对溶菌酶的存在产生影响。此外，目前常用的方法还包括采用高倍稀释的方法来降低蛋清的粘度。稀释液一般为去离子水或盐溶液。用去离子水稀释会产生大量地沉淀，经检验，沉淀中含有大量的溶菌酶，因此逐渐用盐溶液取代了去离子水。然而，通过稀释降低粘度的方法会增加料液体积，加重后续超滤操作的负担，而且如果采用盐溶液作为稀释液，还需增加脱盐等后续操作，使整个工艺复杂化。无论用盐溶液还是磷酸盐缓冲液作为稀释液进行稀释，都会在超滤操作中不同程度的增大料液的处理量，这样就会使处理时间延长，产品成本增加。且在对采用现有方法处理后的蛋清液进行超滤分离后，得到的溶菌酶的收率较低。

发明内容

本发明的发明目的是克服现有提取溶菌酶的方法的溶菌酶的收率低，提取效率低的缺陷，提供一种溶菌酶的收率高，提取效率高的从蛋清中提取溶菌酶的方法。

本发明的发明人发现，蛋清中的溶菌酶仅有一小部分是以游离态存在的，大部分溶菌酶与其它蛋清蛋白，如卵粘蛋白进行可逆性结合而形成大分子复合体。该复合体主要是卵粘蛋白与溶菌酶之间存在的静电作用力造成的，且引力受pH值和离子强度的影响比较大。在采用现有的搅拌或稀释的方法虽然能够降低蛋清液的粘度，但是却无法完全破坏卵粘蛋白与溶菌酶复合体之间的静电作用力，大部分溶菌酶仍然不是以游离态存在的，因此，在进行超滤分离后溶菌酶的收率较低，若要使溶菌酶以单一游离态存在而进行分离，必须首先破坏卵粘蛋白与溶菌酶复合体之间的静电作用力，使处于结合态的溶菌酶解离为游离态的溶菌酶。

本发明提供了一种从蛋清中提取溶菌酶的方法，该方法包括将蛋清进行膜分离，其中，该方法还包括在将蛋清进行膜分离之前，先将蛋清中处于结合态的溶菌酶解离为游离态的溶菌酶。

按照本发明，要使溶菌酶以单一游离态存在而进行分离，必须首先破坏卵粘蛋白与溶菌酶复合体之间的静电作用力，使处于结合态的溶菌酶解离为游离态的溶菌酶。由于蛋清中的高分子蛋白多为糖蛋白，而卵粘蛋白其实也是糖蛋白，本发明提供的使处于结合态的溶菌酶解离为游离态的溶菌酶的优选的方法为在葡萄糖氧化酶(GOD)的存在下，使蛋清与含氧气体或能产生含氧气体的物质接触，而葡萄糖氧化酶(GOD)能催化葡萄糖的氧化，在有氧条件下能将葡萄糖氧化成与其性质完全不同的葡萄糖酸-δ-内酯，通过降解多糖即卵粘蛋白的方法削弱卵粘蛋白与溶菌酶之间的相互作用力，而使溶菌酶解离成为游离态，为随后的膜分离提供良好的条件。采用本发明的方法得到的溶菌酶的提取效率较高，且采用本发明的分离方法不会破坏蛋清中的其它蛋白质，且操作方法、工艺步骤简单，可以应用于蛋白粉生产工艺中，同时又提取高附加值的溶菌酶。

附图说明

图1为本发明的方法中用于膜分离的超滤装置示意图。

具体实施方式

按照本发明，所述从蛋清中提取溶菌酶的方法包括将蛋清进行膜分离，其中，该方法还包括在将蛋清进行膜分离之前，先将蛋清中处于结合态的溶菌酶解离为游离态的溶菌酶。