[发明专利]组织因子途径抑制剂的微孔板筛选方法及其应用

权利要求书

1.一种组织因子途径抑制剂的高通量筛选方法，依次包括如下步骤：

a、将细胞与待测药物共同孵育后，经冻融、吹打后得到细胞裂解液；

b、吸取细胞裂解液于微孔板上，温育，每孔加入人凝血酶原复合物溶液，温育；

c、在b步骤得到的反应液中加入发色底物溶液，温育，用酶标仪以405nm测定吸光度值。

2.权利要求1的高通量筛选方法，其中细胞是能刺激表达组织因子的细胞或固有表达组织因子的细胞。

3.权利要求2的高通量筛选方法，其中能刺激表达组织因子的细胞是外周血单核细胞、血管内皮细胞；固有表达组织因子的细胞是血管平滑肌细胞、星状胶质细胞、胎盘滋养层细胞、成纤维细胞、肿瘤细胞或胰岛细胞。

4.权利要求1的高通量筛选方法，其中人凝血酶原复合物溶液中含CaCL₂，CaCL₂的浓度是：50-200mM。

5.权利要求1的高通量筛选方法，其中人凝血酶原复合物溶液的浓度是：5mg/ml-20mg/ml。

6.权利要求1的高通量筛选方法，其中人凝血酶原复合物溶液与细胞裂解液的体积比为5∶1～10∶1。

7.权利要求1的高通量筛选方法，其中发色底物溶液是凝血因子FXa的发色底物。

8.权利要求1的高通量筛选方法，其中发色底物溶液的浓度是：0.5mM-1mM。

9.羟基芫花素、鲁斯可皂苷元、槲皮素、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1或薯蓣皂苷元用于制备治疗与组织因子途径抑制剂相关的疾病的用途。

10.权利要求1的高通量筛选方法，其中的组织因子途径抑制剂是羟基芫花素、鲁斯可皂苷元、槲皮素、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1或薯蓣皂苷元。