[发明专利]一种仙人掌类植物DNA的提取和纯化方法

权利要求书

1.一种仙人掌类植物DNA的提取和纯化方法，其特征在于：将经过预处理的试样于液氮中磨成粉末，加入65℃的细胞裂解液后置65℃水浴中保持，然后离心，吸取上清液，加入4℃饱和酚溶液和常温氯仿，离心，吸取上清液，加入4℃乙酸钾溶液和-20℃异丙醇，置于-20℃的冰柜中进行沉淀，吸取团状DNA沉淀用70％乙醇洗涤并风干，然后沉淀用4℃TE缓冲液充分溶解，溶解后加入4℃饱和酚和常温氯仿，重复从第二次离心至风干沉淀的操作一次，所得沉淀用4℃TE缓冲液溶解即得DNA的TE溶液。

2.按照权利要求1所述的仙人掌类植物DNA的提取和纯化方法，其特征在于：

(1)取5～8g经过预处理的试样于液氮中迅速研磨成粉末，然后快速转移至1.5ml离心管中；

(2)立即加入65℃预热的细胞裂解液600μl，置于65℃水浴中保温50～70分钟，其间每隔5～10min轻摇1次，将裂解样离心18～22分钟，吸取上清液于离心管中；

(3)在步骤(2)的离心管中加入上清液同体积的4℃饱和酚溶液和常温氯仿，轻摇8～12分钟，以12000r/min离心18～22分钟；

(4)吸取上清液于1.5ml离心管中，加入上清液体积0.1倍的4℃乙酸钾溶液和上清液同体积的20℃异丙醇，放置于20℃的冰柜中18～22分钟；

(5)吸取离心管中的团状DNA沉淀于1.5ml离心管中，用70％乙醇洗涤沉淀2次，风干沉淀；

(6)沉淀用4℃TE缓冲液溶解，在4℃保存2小时使DNA充分溶解；

(7)重复(3)～(5)的操作一次，沉淀加4℃TE缓冲液300μl溶解，保存于4℃的冰箱备用。

3.按照权利要求2所述的仙人掌类植物DNA的提取和纯化方法，其特征在于：

(1)取5～8g经过预处理的试样于液氮中迅速研磨成粉末，然后快速转移至1.5ml离心管中；

(2)立即加入65℃预热的细胞裂解液600μl，置于65℃水浴中保温1小时，其间每隔5～10min轻摇1次，将裂解样离心20分钟，吸取上清液于离心管中；

(3)在步骤(2)的离心管中加入上清液同体积的4℃饱和酚溶液和常温氯仿，轻摇10分钟，以12000r/min离心20分钟；

(4)吸取上清液于1.5ml离心管中，加入上清液体积0.1倍的4℃乙酸钾溶液和上清液同体积的-20℃异丙醇，放置于-20℃的冰柜中20分钟；

(5)吸取离心管中的团状DNA沉淀于1.5ml离心管中，用70％乙醇洗涤沉淀2次，风干沉淀；

(6)沉淀用4℃TE缓冲液溶解，在4℃保存2小时使DNA充分溶解；

(7)重复(3)～(5)的操作一次，沉淀加4℃TE缓冲液300μl溶解，保存于4℃的冰箱备用。

4.按照权利要求1、2或3所述仙人掌类植物DNA的提取和纯化方法，其特征在于：所述细胞裂解液为2％CTAB细胞裂解液。

5.按照权利要求4所述仙人掌类植物DNA的提取和纯化方法，其特征在于：所述细胞裂解液的配制方法为：在去离子水中加入CTAB 4g、NaCl 16.364g和1mol/l的Tris-HCl 20ml，充分溶解，定容至200ml。

6.按照权利要求1、2或3所述仙人掌类植物DNA的提取和纯化方法，其特征在于：所述饱和酚溶液的pH值为8.5。

7.按照权利要求1、2或3所述仙人掌类植物DNA的提取和纯化方法，其特征在于：所述乙酸钾溶液是浓度为3mol/l、pH值为5.2的乙酸钾水溶液。