[发明专利]残留的青霉素类抗生素酶解产物的检测方法

说明书

技术领域

本发明提供了一种检测方法，其为一种青霉素类(属于β-内酰胺类)抗生素的酶解残留物的检测，尤其是指乳和乳制品中青霉素类抗生素酶解残留物的检测。

背景技术

由于国标中规定原料奶收购时必须“无抗”，一些不法奶站便人为使用抗生素酶水解乳中残留的抗生素，这类水解酶制剂及酶水解产物没有做过相关的安全性评价，对于消费者存在直接或间接的安全隐患。现有的抗生素酶的主要成分是青霉素类酶，该酶主要针对β-内酰胺类的抗生素，如青霉素钾、钠、氨苄青霉素等。一般来说，青霉胺、青霉醛、青霉噻唑酸、  青霉烯酸是常用的抗生素青霉素水解后的主要产物，其中青霉噻唑酸含量相对最高。一般的检测方法有高效液相色谱法，分光光度法，但是，这些方法都是针对高浓度的药品，残留级的抗生素水解残留物的检测至今未有相关报道。上述的高效液相色谱法和分光光度法的缺点主要有两点，一、都不能用来检测残留级的青霉噻唑酸；二、都不是针对牛奶里残留的青霉噻唑酸；而且，现有方法均缺乏必要的前处理过程，因此不能用来检测乳和乳制品中的残留青霉素类抗生素的酶解残留物青霉噻唑酸的残留量。

由于乳和乳制品中青霉素类抗生素酶解残留物的检测方法未见报道，为了确保原奶及其产品的质量和安全，本领域急需一种可以检测乳和乳制品中青霉素类抗生素酶解残留物的方法，尤其是检测残留青霉素类抗生素的酶解残留物青霉噻唑酸的方法。

发明内容

为了确保乳品的安全质量和消费者的健康，本发明人开发了一种青霉素类抗生素酶解残留物的检测方法，尤其是指乳和乳制品中青霉素类抗生素酶解残留物的检测方法，该方法能够有效地检测乳和乳制品中残留的抗生素酶解产物青霉噻唑酸。

本发明的目的在于提供一种残留的抗生素酶解产物的检测方法，该方法采用与标样对比出峰时间的方法确认酶解物，可以有效地检测乳和乳制品中残留的青霉素类抗生素酶解残留物青霉噻唑酸钾，并可根据特定峰的峰面积经过测绘出标准曲线来定量其浓度范围。

本发明所述的酶解残留物也可称为酶解产物，在本发明的检测方法中一般指青霉噻唑酸类物质。

本发明提供了一种残留的青霉素类抗生素酶解产物的检测方法，包括：

1.样品的预处理，该预处理的步骤包括：

(1)取待检乳样离心；

(2)去掉上层的脂肪层，得到脱脂乳；

(3)在脱脂乳中加入无水乙醇，离心；

(4)抽取上清液，过滤，得到清液作为待检样品；

2.检测，该检测的步骤包括：

(1)取空白样品按上述1中的预处理的步骤处理后，作为空白样(对照样)；

(2)取10μl浓度至少为40μg/l的青霉素类的酶解产物作标样(酶解产物标样)；

(3)液相条件：色谱柱为反相色谱柱；流动相为体积比1∶3～3∶1的甲醇∶磷酸盐，该磷酸盐包括磷酸二氢钠或磷酸氢二钠；检测器为紫外检测器；检测波长为220-245nm；

(4)将待检样品、空白样和青霉素类的酶解产物标样用高效液相色谱仪按照(3)中的液相条件进行检测；

3.以酶解产物标样的出峰时间为定性依据，确定待检样品中酶解产物是否存在以及存在的浓度。

本发明的上述检测方法通过将含有(或者未含有)抗生素酶解物的乳品(包括原料乳或乳制品)，经过包括去除乳脂肪、乳蛋白质等大分子成份的前处理，在设定的检测条件下用HPLC进行测定，从而能够有效地检测乳品中残留的青霉素类抗生素的酶解产物，能够检测到的酶解产物的最低限为40μg/l，准确率高。

其中，上述检测方法优选在配好流动相之后，予以放置，目的是使流动相的PH值更加稳定。

在本发明的检测方法中，作为青霉素类抗生素酶解产物的标样青霉噻唑酸钾等标样的浓度可以至少是40μg/l，优选为40-200μg/l，最优选100μg/ml。

在用高效液相方法进行检测的时候，流动相可以是醇和磷酸盐的混合液，例如，甲醇和磷酸二氢钠的混合液，或甲醇和磷酸氢二钾的混合液，优选甲醇和磷酸二氢钠的混合液；该混合液中甲醇和磷酸二氢钠/磷酸二氢钾的体积比优选为1∶3～3∶1，更优选1∶2～2∶1，最优选1∶1。

利用高效液相进行检测所采用的仪器包括波长检测器，为了得到更好的干扰最少的HPLC图谱，经过筛选，所述的检测波长一般可以选择在210-255nm，优选为220-245nm，更优选230-240nm，最优选大约为235nm；当流动相为1∶1(体积比)的甲醇和磷酸盐(例如甲醇和磷酸二氢钠)时，最优选的检测波长为235nm。