[发明专利]从生物学样品富集靶细胞的方法及除去白细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从生物学样品富集靶细胞的方法及除去白细胞的方法。

背景技术

包括干细胞、胎儿细胞、循环肿瘤细胞(CTC)、免疫细胞等在内的 细胞在疾病的预防、检测、诊断和治疗方面有很大应用。

干细胞是指一类具有自我复制能力的多潜能细胞，包括骨髓干细胞、 成体干细胞、脐血干细胞、皮肤干细胞等。在一定条件下，干细胞可以分 化成多种功能细胞，因此干细胞具有治疗许多疑难病症、提供器官移植， 以及康复、保健，减轻老化、恢复青春活力等等广泛应用。

已经证明早在妊娠五周母血循环中就可监测出胎儿细胞。目前，获取 胎儿细胞进行产前诊断的方法主要有羊膜腔穿刺、绒毛活检和脐血管穿刺。 这些手段对胎儿有一定的风险，有可能造成流产。从母血中分离出胎儿细 胞预示着只需通过简单的静脉穿刺途径即可获得胎儿细胞。胎儿细胞的临 床应用将包括早期诊断胎儿染色体或基因异常。

大量报道提示甚至可在以成像分析方式检测到原发肿瘤之前，可在患 者中发现循环肿瘤细胞(CTC)。除了在早期诊断和预测中的潜在作用外， CTC还可在表征随肿瘤进程的遗传和免疫表型变化中发挥主要作用，从而 有助于指导个体化治疗。

由于免疫系统或其他系统的疾病，或由于免疫接种或某些临床治疗措 施及某些外界环境因素的影响，免疫细胞(例如T淋巴细胞、B淋巴细胞， K淋巴细胞或NK淋巴细胞)的数量或功能均可发生变化。因此，进行细 胞免疫检测，对于某些疾病的诊断和发病机理研究、免疫治疗或预防接种 的效果评估及环境因素对机体免疫功能的影响，都具有重要的意义。

但是所述干细胞、胎儿细胞、循环肿瘤细胞(CTC)、免疫细胞在生 物学样品，例如血液、骨髓、脊髓或手术液等中存在量较少，属于稀有细 胞，所以富集这些靶细胞成为首要问题。

尽管已将各种技术用于富集、分离和表征靶细胞，但是其中许多具有 相似的原理，即基于抗体的正选择。由于细胞表面标记的异质性表达，这 些用于靶细胞检测的策略显然受到以下因素的限制：抗不同靶细胞上的生 物标记的抗体的可获得性、敏感性和特异性。其它策略包括红细胞(RBC)、 白细胞(WBC)的负除去。目前主要基于大小过滤除去较小的RBC和WBC， 但因为某些靶细胞例如CTC可如WBC一样小，所述基于大小过滤的方法 有丢失靶细胞的危险。

对于除去白细胞的方法，现有技术中虽存在使用抗CD45包被的30nm 磁珠(Miltenyi产品，Germany)除去白细胞的方法，但该方法不仅昂贵(RMB 600-700/试验)，费时(超过4小时/试验)，而且WBC去除效率不高(WBC 去除率为约2-3logs)。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明创造性地将基于摩尔渗透压浓度 (osmolarity)的方式与免疫亲和层析法联合起来用于分别去除RBC和 WBC，从而达到富集靶细胞，尤其是稀有细胞的目的。该方法不仅成本低， 而且高效地使靶细胞得以富集，并易于后续检测。所述靶细胞包括干细胞、 胎儿细胞、循环肿瘤细胞(CTC)、免疫细胞等。

本发明还提供了一种除去白细胞的方法，该方法不仅成本低，省时， 而且效率高。

具体实施方式

在本发明的一个具体实施方式中，本发明提供一种从生物学样品富集 靶细胞的方法，该方法包括：

用基于摩尔渗透压浓度的方式除去红细胞和用免疫亲和层析法除去白 细胞。

本发明创造性地联合应用基于摩尔渗透压浓度的方式除去红细胞和免 疫亲和层析法除去白细胞来富集靶细胞。利用摩尔渗透压浓度的方式除去 红细胞和利用免疫亲和层析法除去白细胞这两个过程没有特别的顺序要 求。例如可以先利用亲和层析法除去白细胞然后再利用基于摩尔渗透压浓 度的方式除去红细胞；或者用基于摩尔渗透压浓度的方式除去红细胞然后 再利用亲和层析法除去白细胞。为了更快地、更有效地使白细胞通过亲和 层析柱，在本发明的一个优选实施方式中，用基于摩尔渗透压浓度的方式 除去红细胞然后再利用亲和层析法除去白细胞。