[发明专利]生产L－蛋氨酸前体的微生物以及由L－蛋氨酸前体制备L－蛋氨酸和有机酸的方法

权利要求书

1.一种生产L-蛋氨酸和有机酸的方法，其特征在于包括如下步骤：

1)生产L-蛋氨酸前体的步骤，该步骤是通过删除或削弱参与从O- 乙酰基-L-高丝氨酸或O-琥珀酰基-L-高丝氨酸中选择的L-蛋氨酸前体降 解的胱硫醚伽马合酶的活性，同时培养提高了高丝氨酸O-乙酰基转移酶 或高丝氨酸O-乙酰转移酶活性的埃希氏菌属，并通过发酵以生产作为L- 蛋氨酸前体的O-酰基高丝氨酸；以及

2)生产L-蛋氨酸和有机酸的步骤，该步骤是通过将甲硫醇作为硫源 和上述步骤中生产的L-蛋氨酸前体作为底物，并且利用转化酶进行酶反应 以生产L-蛋氨酸和有机酸，该转化酶选自具有胱硫醚伽马合酶、O-琥珀 酸高丝氨酸硫化氢解酶或O-乙酰基高丝氨酸硫化氢解酶活性的酶组成的组， 其中，上述有机酸是琥珀酸或乙酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该胱硫醚伽马合酶被 metB基因编码。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，上述步骤1)中的埃 希氏菌属删除或敲除包含在苏氨酸生物合成渠道中的高丝氨酸激酶。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，基因编码该高丝氨酸 激酶的是thrB。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中的埃希氏 菌属的特征在于所用的菌株其由高丝氨酸合成L-蛋氨酸前体渠道被提 高。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，该L-蛋氨酸前体的合 成通过metA基因编码高丝氨酸O-琥珀酰基转移酶或metX基因编码高 丝氨酸O-乙酰基转移酶的过表达提高。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，该L-蛋氨酸前体的合 成是通过分离自反馈调节系统的高丝氨酸O-琥珀酰基转移酶或高丝氨酸 O-乙酰基转移酶的诱导提高。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，该L-蛋氨酸前体的合 成是通过删除或敲除包含在L-蛋氨酸前体合成基因中的调节基因来提 高。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，包含在L-蛋氨酸前体 合成基因的转录中的调节基因是metJ。

10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，微生物菌株的该可 靠的高丝氨酸O-琥珀酰基转移酶被删除或敲除，然后新的外部或可靠的 高丝氨酸O-乙酰基转移酶被诱导或提高，目的是在合成中提高O-乙酰 基高丝氨酸，该L-蛋氨酸前体。

11.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，微生物菌株的该可 靠的高丝氨酸O-乙酰基转移酶被删除或敲除，然后新的外部或可靠的高 丝氨酸O-琥珀酰基转移酶被诱导或提高，目的是在合成中提高O-琥珀 酰高丝氨酸，该L-蛋氨酸前体。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该L-蛋氨酸前体产 生菌株是保藏号为KCCM-10568的衍生自分离于依赖蛋氨酸的苏氨酸产 生菌株大肠杆菌MF001。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该埃希氏菌属是保藏 号为KCCM-10767的大肠杆菌CJM-BTJ pMetA-CL，O-琥珀酰高丝氨酸 产生菌株。

14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该埃希氏菌属是保藏 号为KCCM-10872的大肠杆菌CJM-B TJ pCJ-Met A-CL，O-琥珀酰高丝 氨酸产生菌株。

15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该埃希氏菌属是保藏 号为KCCM-10873的大肠杆菌CJM-BTJA pCJ-MetX-CL，O-乙酰基高 丝氨酸产生菌株。

16.一种用于制备权利要求1的步骤1)中的L-蛋氨酸前体的菌株， 其特征在于，埃希氏菌属。