[发明专利]量化HIV表型或趋向性试验

说明书

技术领域

本发明涉及用于预测感染人类免疫缺陷病毒(HIV)的患者中的量化表型例如gag-表型、整合酶表型或趋向性的方法。

背景技术

人类免疫缺陷病毒，通常称为HIV，是主要感染人类免疫系统的重要组成部分诸如CD4+T细胞、巨噬细胞和树突细胞的逆转录病毒。HIV甚至直接地或者间接地破坏CD4+T细胞。当已有足够多的CD4+T细胞被HIV破坏时，免疫系统几乎不能发挥作用，这将导致AIDS(获得性免疫缺陷综合征)。此外，HIV直接攻击器官，诸如肾、心脏和大脑，导致急性肾功能衰竭、心肌病、痴呆和脑病。感染HIV的人们所面对的许多问题源自于免疫系统不能保护其免受机会性感染和癌症。据认为AIDS源自于二十世纪的撒哈拉以南的非洲地区，现在则为全球流行。在2004年末，UNAIDS估计近4千万人携带HIV。世界卫生组织估计AIDS流行已夺走超过3百万人的生命，同年则有5百万人感染HIV。目前，估计已有2千8百万人死亡，仅非洲就感染9千万人，仅在非洲大陆就导致最低估计1千8百万的孤儿。

为感染细胞，病毒必须首先能够进入其中。HIV是包膜病毒，通过融合病毒细胞膜和细胞质膜实现进入细胞。该过程通过病毒包膜蛋白gp120和gp41进行，它们作为切割之前的单一160kD蛋白而被合成。此切割的产物保持相连直至病毒进入细胞的过程开始。gp120结合CD4+T淋巴细胞和单核细胞/巨噬细胞系的细胞上的CD4。此结合事件以及gp120和细胞辅助受体之间的进一步相互作用导致gp120脱离gp41。所述gp120的脱离作为gp41的构象变化的一部分发生，所述构象变化使gp41处于“融合活性”形式。此形式的gp41能介导所述细胞和病毒膜之间的融合。HIV进入的主要细胞受体是CD4。然而，在目标细胞上CD4的表达对HIV进入和感染是必要但不充分的。在细胞表面与CD4共表达时，数种趋化因子受体用作辅因子以允许HIV进入。

CCR5和CXCR4是HIV所使用的进入人类细胞的主要辅助受体。根据该辅助受体的使用，在1998年建立了新的HIV分类，即，CCR5-趋向性(R5)、CXCR-趋向性(X4)，或双趋向性(R5/X4)HIV毒株。早几年已鉴定出病毒表型(即，非合胞体诱导型，NSI或合胞体诱导型，SI)和HIV毒株的毒力之间的关系。

目前的知识显示，在体外，R5病毒通常响应于T-细胞系上的NSI并能够在单核细胞-巨噬细胞(M-趋向性)中复制，所有特征先前关联于更小毒力的毒株。相反，X4毒株是T-细胞系上的SI并优选在T淋巴细胞上复制(T-趋向性)，致病性更强的病毒株的所有特征。基于这样的知识，认为HIV辅助受体的使用与疾病进程相关。

这些辅因子中第一个被鉴别的是CXCR4，或融合素，其在T细胞上表达(Feng等，HIV-1 entry cofactor:functional cDNA cloning of aseven-transmembrane，G protein-coupled receptor.Science 1996 May 10；272(5263):872-877.)。CXCR4和CD4在细胞上的共表达允许T-趋向性HIV分离物与细胞融合并感染之。CXCR4在许多T细胞上表达，但通常不在巨噬细胞上表达，因此不允许与巨噬细胞-趋向性(M-趋向性)HIV分离物相融合(Feng等，1996)。

在鉴别出CXCR4之后不久，鉴别出另一辅助受体。在巨噬细胞和一些T细胞群体上表达的CCR5也能与CD4协同作用从而允许HIV膜融合(Deng等，Identification of a maj or co-receptorfor primary isolates ofHIV-1.Nature 1996 Jun 20；381(6584):661-6.)。HIV gp120与CCR5结合是CD4-依赖性的，因为CD4的抗体抑制能减少87％的与CCR5的结合(Trkola等，CD4-dependent，antibody-sensitive interactions betweenHIV-1 and its co-receptor CCR-5.Nature 1996 Nov 14；384(6605):184-7)。M-趋向性HIV分离物似乎使用CCR5作为其辅助受体以感染巨噬细胞和一些T细胞。