[发明专利]一种裂解肽的C端肽键的方法和确定肽的C端氨基酸序列的方法

权利要求书

1.一种裂解肽的C端的肽键的方法，所述方法包括下列步骤:

使肽与包含醇的全卤化羧酸溶液反应，以酯化所述肽的谷氨酸残基；和

使所述肽与链烷酸酐反应，以获得缺失了C端的肽，其中所述肽在C端的氨基酸残基被顺序地删除。

2.根据权利要求1所述的方法，其中使所述肽与包含醇的全卤化羧酸溶液反应的所述步骤是操作(performing)被基底支持的所述肽的步骤。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述基底是聚丙烯酰胺凝胶。

4.根据权利要求1到3任一项所述的方法，其中所述包含醇的全卤化羧酸溶液是选自由水溶液和醇溶液组成的组的溶液。

5.根据权利要求1到4任一项所述的方法，其中所述醇具有1-5个碳原子。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述醇是甲醇。

7.根据权利要求1到6任一项所述的方法，其中所述全卤化羧酸选自由三氯乙酸，三氟乙酸，五氟丙酸和七氟丁酸组成的组。

8.根据权利要求7的方法，其中所述全卤化羧酸是三氟乙酸。

9.根据权利要求1到8任一项所述的方法，其中所述全卤化羧酸溶液具有100-600:150-350:300-700的体积比的水：甲醇：TFA。

10.一种确定肽的C端氨基酸序列的方法，其包括下列步骤:

使肽与包含醇的全卤化羧酸溶液反应，以酯化所述肽的谷氨酸残基；

使所述肽与链烷酸酐反应，以获得缺失了C端的肽，其中所述肽在C端的氨基酸残基被顺序地删除；

测量所述缺失了C端的肽的分子量；和

基于所述分子量确定所述肽。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述基于所述分子量确定所述肽的所述步骤是基于所述肽的分子量和所述缺失了C端的肽的分子量之间的差异确定所述肽的C端氨基酸序列的步骤。

12.一种确定肽的C端氨基酸序列的方法，其包括下列步骤:

使肽与包含醇的全卤化羧酸溶液反应，以酯化所述肽的谷氨酸残基；

使所述肽与链烷酸酐反应以获得缺失了C端的肽，其中所述肽在C端的氨基酸残基被顺序地删除；

使所述肽与位点特异性的裂解剂反应，以获得来自所述缺失了C端的肽的缺失了C端的肽来源的肽片段；

测量所述缺失了C端的肽来源的肽片段的分子量；和

基于所述分子量确定所述肽。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述位点特异性的裂解剂是选自由胰蛋白酶，V8蛋白酶和CNBr组成的组的试剂。

14.一种确定由基底支持的肽的C端氨基酸序列的方法，其包括下列步骤:

使由基底支持的肽与包含醇的全卤化羧酸溶液反应，以酯化所述肽的谷氨酸残基；

使所述肽与链烷酸酐反应，以获得缺失了C端的肽，其中所述肽在C端的氨基酸残基被顺序地删除；

将所述基底浸入包含位点特异性裂解剂的溶液中，以获得来自所述缺失了C端的肽的缺失了C端的肽来源的肽片段；

测量所述缺失了C端的肽来源的肽片段的分子量；和

基于所述分子量确定所述肽。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述基于所述分子量确定所述肽的所述步骤是基于所述缺失了C端的肽来源的肽片段的分子量和对应于来自于所述肽的所述肽片段的肽片段的分子量之间的差异来确定所述肽的C端氨基酸序列的步骤。

16.根据权利要求14或15所述的方法，其中所述包含醇的全卤化羧酸的溶液具有150-350:300-700的体积比的甲醇：TFA。

17.根据权利要求14到16任一项所述的方法，其中所述位点特异性裂解剂是选自由胰蛋白酶，V8蛋白酶和CNBr组成的组的试剂。

18.根据权利要求14到17任一项所述的方法，其中所述基底是聚丙烯酰胺凝胶。