[发明专利]用于生成萜的方法和用于该方法的MEP转化后的微生物

权利要求书

1.重组酵母属真菌，其含有被整合到该真菌的基因组中的编码 功能性的DXP还原异构酶、MEP胞苷酰基转移酶、CDP-ME激酶、 MECDP合酶、MECDP还原酶和HMBPP还原酶的外源基因，并 且含有将5-磷酸1-脱氧-D-木糖酮酯(DXP)转变为焦磷酸异戊烯酯 (IPP)和/或焦磷酸二甲基烯丙酯(DMAPP)的外源途径，而所述真菌 的天然代谢缺乏该途径。

2.权利要求1所述的真菌，其进一步包含生成DXP的外源基 因。

3.权利要求1所述的真菌，其包含4-磷酸2-甲基赤藻糖醇酯 (MEP)途径的外源基因。

4.权利要求2所述的真菌，其含有编码功能性的DXP合酶、 DXP还原异构酶、MEP胞苷酰基转移酶、CDP-ME激酶、MECDP 合酶、MECDP还原酶和HMBPP还原酶的外源基因。

5.前述权利要求任一项所述的真菌，其还包含编码功能性萜合 酶的至少一种外源基因。

6.权利要求5所述的真菌，当在合适的微生物培养基上合成萜 时，基于每g微生物干重获得至少100μg萜的产率。

7.权利要求1所述的真菌，其进一步包含编码功能性单萜合 酶、倍半萜合酶和/或二萜合酶的至少一种外源基因。

8.根据权利要求2所述的真菌，该真菌为保藏号DSM 17900 的酿酒酵母菌株YIP-DV-02。

9.一种在真菌细胞和/或培养基中积聚萜的方法，其中所述真 菌为根据权利要求1～8任一项所述的重组真菌。

10.权利要求9所述的方法，包含在适合的培养基中培养所述 真菌的步骤。

11.生成萜的方法，该方法包含在适合所述萜生成的培养基上 培养权利要求1～8任一项所述的真菌的步骤和非强制性选择的从 所述培养基和/或所述真菌中分离该萜的步骤。

12.权利要求10或11所述的方法，其中培养真菌的步骤至少 部分地通过两阶段发酵来实施。

13.制备能够积聚和/或生成萜的重组酵母属真菌的方法，该方 法包括用编码功能性DXP还原异构酶、MEP胞苷酰基转移酶、 CDP-ME激酶、MECDP合酶、MECDP还原酶和HMBPP还原酶的 基因和至少一种编码萜合酶的基因转化缺乏天然MEP途径的真菌 的步骤，这些基因被整合到该真菌的基因组中。

14.增加缺乏天然MEP途径的酵母属真菌中萜前体含量的方 法，该方法包括用编码功能性DXP还原异构酶、MEP胞苷酰基转 移酶、CDP-ME激酶、MECDP合酶、MECDP还原酶和HMBPP 还原酶的基因和非强制性选择的至少一种编码萜合酶的基因转化 所述真菌的步骤，这些基因被整合到所述真菌的基因组中。