[发明专利]结合分子

说明书

发明领域

本发明涉及包含连接到二聚化结构域(dimerisation domain)氨基 端和羧基端两端的VH结合结构域(如本文定义)的多肽结合复合体 (polypeptide binding complex)的制备方法。用本发明方法制备的VH结 合结构域和二聚化结构域相对于现有技术所述scFv衍生的多肽结合 复合体，具有内在结构和功能的稳定性，因此为产品制造和产品稳定 性提供了优势。本发明还描述了其用途。

发明背景

单克隆抗体或其变异体将在21世纪新药的投放中占较大的比例。 单克隆抗体疗法已被公认是用于治疗类风湿性关节炎和克罗恩病 (Crohn’s disease)的优选途径，并且在癌症治疗中取得了重大进展。用 于治疗心血管疾病和传染病的基于抗体的产品也在开发之中。大多数 市售的单克隆抗体产品识别并结合靶配体(例如TNFα)上的单个定义 明确的表位。装配包括两条重链和两条轻链的复合体(H₂L₂复合体)， 以及随后的翻译后糖基化过程需要利用哺乳动物生产系统。通过哺乳 动物细胞培养制造抗体的生产成本和资金成本高昂，而且在缺乏可接 受的替代方法时，有限制基于抗体的疗法潜力的风险。多种转基因生 物能够表达全功能性抗体，包括植物、昆虫、鸡、山羊和牛。可在大 肠杆菌(E.coli)中生产功能性抗体片段，但是除非在制造过程中进行聚 乙二醇化，否则产品的血清稳定性通常较低。

双特异性抗体复合体是基于工程Ig的能够结合相同或不同抗原 上两种不同表位的分子。双特异性结合蛋白单独或与其它结合剂联用 掺入抗体，从中获得的人免疫功能而产生治疗效果，显示出是有前景 的治疗模式，例如清除病原体(Van Spriel等，(1999)J.Infect.Diseases， 179，661-669；Tacken等，(2004)J.Immunol.，172，4934-4940；US 5,487,890)、治疗癌症(Glennie和van der Winkel，(2003)Drug Discovery Today，8，503-5100)和免疫疗法(Van Spriel等，(2000)Immunol.Today， 21，391-397；Segal等，(2001)J.Immunol.Methods，248，1-6；Lyden等， (2001)Nat.Med.，7，1194-1201)。

制造方面问题的复杂性在于双特异性抗体产物以两种或更多种 H₂L₂复合体为基础。例如两套或更多套重链和轻链基因的共同表达可 导致形成高达10种不同的组合，其中仅有一种为所需的异二聚体 (Suresh等，(1986)Methods Enzymol.，121，210-228)。

为解决这一问题，开发了许多方法以用哺乳动物细胞生产保留重 链效应子功能(effector function)的全长双特异性IgG形式(BsIgG)。 BsIgG需要工程改造的“杵臼结构(knob and hole)”重链以防止异二聚 体形成，并且利用相同L-链来避免L-链错配(Carter，(2001)J.Immunol. Methods，248，7-15)。还有研究描述了备选的化学交联方法，用以由各 个识别不同抗原的抗体片段制备复合体(Ferguson等，(1995)Arthritis and Rheumatism，38，190-209)，或者将其它结合蛋白(例如胶原凝集素) 与抗体片段交联来制备复合体(Tacken等，(2004)J.Immunol.，172， 4934-4940)。