[发明专利]在转基因动物中产生仅有重链之抗体

说明书

发明领域

本发明涉及用于在转基因非人类哺乳动物中产生应答抗原攻击 的、多样的亲和力成熟的功能性仅有重链之抗体(heavy chain-only antibody，即仅有重链的抗体)谱(repertoire)的改进方法及其应用。本 发明也涉及产生来自多个基因座的多样的类型特异性仅有重链之抗 体谱。

特别是，本发明涉及用于产生人抗原特异性的、高亲和力的任 何类型或类型组合的仅有重链之抗体以及分离并表达功能完整的V_H抗原结合区的方法。

也描述了使用本发明的方法所产生的仅有重链之抗体。

在以下说明书中，所有氨基酸残基的位置编号按照Kabat等，[1] 设计的编号系统来给出。

发明背景

抗体

抗体的结构为本领域所熟知。大多数天然抗体是包含两条重链 和两条轻链的四聚体。重链通过位于每条重链约中间位置的铰链区 之间的二硫键彼此连接。轻链在铰链区的N末端与每条重链连接。 每条轻链一般通过接近铰链区的二硫键与各自的重链连接。

当抗体分子正确地折叠时，每条链折叠成通过更具线性的多肽 序列连接的许多不同的球形结构域。例如，轻链折叠成可变区(V_L)和 恒定区(C_L)。重链具有单个可变区V_H、第一恒定功能区(C_H1)、铰链 区和2或3个另外的恒定功能区。重链恒定功能区与铰链区一起形 成众所周知的抗体重链的所谓恒定区(constant region)。重链可变区 (V_H)与轻链可变区(V_L)的相互作用导致形成抗原结合区(Fv)。重链与 轻链的相互作用通过重链的C_H1区与轻链的C_K或Cλ区来促进。一 般来说，V_H和V_L两者对于抗原结合是必需的，尽管业已表明重链二 聚体和氨基末端片段在没有轻链的情况下保留活性[2]。

在重链(V_H)和轻链(V_L)两者的可变区内，某些短多肽区段表现出 异常的变异性。这些区段称为超变区或互补性决定区(CDR)。间插区 段称为构架区(FR)。在每个V_H和V_L区中，有三个CDR(CDR1- CDR3)。

在哺乳动物中，有5种类型的抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和 IgM，在人中存在4种IgG亚型和2种IgA亚型。