[发明专利]具有生物活性的肽化合物、其制备及其应用

说明书

本发明涉及具有生物活性，特别是具有抗微生物性质的肽化合物， 其制备及其应用。

已知，当给人或动物施用活微生物时，一些微生物能够对宿主的 健康施加有益影响，特别是通过产生抗微生物物质来施加作用。

这样的微生物通常称为益生菌(probiotic organism)。

多种研究已经表明了这些益生菌对于人或动物的有益作用，特别 是在治疗胃肠道病症例如腹泻、急性腹泻以及与使用药物有关的腹泻 中的用途。

迄今为止所研究的益生菌是乳酸菌，但是已经报道其他活的微生 物可以对健康具有有益作用。

这些其他微生物包括例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽 孢杆菌(Bacillus licheniformis)、凝固芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、蜡 样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、Bacillus polyfermentans。

在这些微生物当中，克劳氏芽孢杆菌已经在以商标名 市售的药物组合物中使用了很多年。

该药物组合物特别用于治疗胃肠道病症，并且包含克劳氏芽孢杆 菌的四个菌株的混合物。

通常将这些益生菌的抗微生物生物活性与具有抗微生物活性的化 合物例如lantibiotics的天然生成有关。因此，克劳氏芽孢杆菌、 Streptomyces mutans、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)的菌株分别生成枯 草菌素、mutacins和乳链球菌素。

现在有多种抗生素用作治疗感染疾病的治疗物质，但是病原体变 得对于所用药物的抗药性越来越强。这些病原体当中的某些已经称为 “多抗药性”，并且有时极其难以治疗由他们引起的感染。

因此，一直在寻找具有抗生素性质的新分子。

本发明的目的是通过提供得自克劳氏芽孢杆菌的具有抗微生物活 性的化合物来满足该需求。

本发明的第一个目的涉及具有抗微生物活性的化合物。

本发明的第二个目的涉及制备本发明具有抗微生物活性的化合物 的方法。

本发明的第三个目的涉及包含本发明具有抗微生物活性的化合物 的药物组合物。

本发明的第四个目的涉及本发明具有抗微生物活性的化合物的应 用。

根据第一个方面，本发明涉及具有抗微生物活性的化合物。

因此，已经分离并且表征了通过克劳氏芽孢杆菌产生的并且表现 出抗微生物活性的分子。

本发明具有抗微生物活性的化合物具有肽性质，并且可以这样获 得：将克劳氏芽孢杆菌在合适的培养基中培养直至芽孢形成，离心和 过滤后收集培养物的上清液，并且萃取具有抗微生物活性的级份。

主要具有抗革兰氏阳性细菌活性的本发明化合物可以得自克劳氏 芽孢杆菌，并且具有如通过和MALDI TOF和ESI方法测定的2107.5Da 的分子量。

根据另一个特征，本发明化合物是lantibiotic，并且在其肽序列中 具有羊毛硫氨酸桥和修饰的氨基酸。

根据一个其特征，本发明化合物包含以下氨基酸序列和氨基酸衍 生物：

Phe-Dhb-Ala-Val-Dha-Phe-Ala-Abu-Pro-Gly-Ala-Gly-Glu -Dhb-Gly-Ala-Phe-Asn-Ala-Phe-Ala

其中

Dhb代表二脱氢氨基丁酸；

Dha代表二脱氢丙氨酸；

Abu代表氨基丁酸。

本发明化合物具有两个羊毛硫氨酸桥，其中一个位于3位的丙氨 酸与7位的丙氨酸之间，另一个位于16位的丙氨酸与21位的丙氨酸 之间。

此外，在8位的氨基丁酸残基与11位的丙氨酸之间存在甲基-羊毛 硫氨酸桥。第四个桥存在于C-末端氨基-乙烯基-半胱氨酸与19位丙氨 酸残基之间。

用存在的桥表示，本发明化合物具有以下序列：

其中Dha、Dhb和Abu如上所定义。

根据第二个方面，本发明涉及制备本发明化合物的方法。

根据本发明，本发明化合物可以依据以下方法由克劳氏芽孢杆菌 萃取得到。

制备本发明化合物的方法包括以下步骤：