[发明专利]荧光测定法

权利要求书

1.一种对测定样品中非荧光物质进行测定的方法，该方法包括：

(a)在溶液中进行测定样品和荧光标记化合物之间的反应，在时间t₀时，样品和标记化合物结合；

(b)激发标记化合物中的荧光，其中标记物的性质和激发的性质是这样的：即，在通过标记化合物和非荧光物质的反应改变所述荧光的波长发生所述的荧光；

(c)随着反应进程检测所引起的荧光；

(d)当所有的非荧光物质已经与标记化合物反应时，从所检测的荧光计算F₀和F_∞值，F₀是在时间t₀时的荧光，F_∞是在时间t_∞时的荧光；

(e)从F₀和F_∞值计算由于步骤(a)中反应的荧光中背景改变；

(f)从所计算的值和适合的校准算法，确定非荧光物质与荧光标记化合物反应之前，在t₀时样品中存在的非荧光物质的浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)之前，标记化合物被激发，并且检测所引起的初始荧光(F_Blank)。

3.如权利要求2所述的方法，其中利用下面的等式，F₀和F_Blank的值用于计算荧光光密度(FOD)：

FOD＝Log[F_Blank/F₀]        (等式1)

4.如权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中步骤(d)中F₀和F_∞值的计算包括使最佳适合曲线的数学函数适合数据，并且外推该函数到时间t₀和t_∞。

5.如前述任一权利要求所述的方法，其中在(f)部分中所使用的校准算法具有公式y＝mx+c，其中m和c是斜率和截距校准常数，并且x＝(F₀-F_∞)/F₀。

6.如前述任一权利要求所述的方法，其中非荧光物质是主物质的亚种，并且亚种选择性地与标记化合物反应，其中从计算值和公式y＝m’x+c’的适合校准算法，确定在与荧光标记化合物反应之前，在t₀时样品中存在的主物质和亚种的总浓度，其中m’和c’是斜率和截距校准常数，并且x＝Log(F_Blank/F₀)。

7.如前述任一权利要求所述的方法，其中待要测定的物质是糖化蛋白质，并且优选地是糖化血红蛋白。

8.如权利要求7所述的方法，其中标记化合物包含硼酸基团，该基团能够选择性地结合糖化蛋白质的顺式二醇基团。

9.如前述任一权利要求所述的方法，其中荧光标记化合物在200nm到800nm的范围，优选地约510nm具有主要激发波长。

10.如前述任一权利要求所述的方法，其中荧光标记化合物包含荧光素残基。

11.如权利要求10所述的方法，其中荧光化合物是分子式F-NH-CS-NH-Ph-B(OH)₂的基团，其中Ph是苯基，F是荧光素残基。

12.如权利要求10或11所述的方法，其中荧光化合物是结构式I的化合物：

13.如前述任一权利要求所述的方法，其中样品是血液样品，血浆样品、血清样品或尿液样品。

14.如权利要求1所述的方法，以及基本上如这里所述的。

15.一种检测非荧光物质浓度的方法，包括激发匹配的荧光试剂的激发和发射光谱，该光谱重叠非荧光物质的吸收光谱；检测由此引起的荧光；向匹配的荧光试剂添加非荧光物质；添加后检测荧光；和从非荧光物质添加前后所检测的荧光之间的差异计算非荧光物质浓度。