[发明专利]禽流感疫苗和使用方法

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求保护2006年4月21日提交的美国临时申请序列号 60/793,804的利益，所述临时申请特此完整引入作为参考，包括所有的图、 表和氨基酸或核酸序列。

背景技术

近期对已发表的来自越南H5N1菌株的血凝素(HA)序列的检测表 明，这些高致病菌株比先前观察的菌株更易变异。因此不期望与攻击菌株 具有低于90％同源性的疫苗在控制症状或减少散播(shedding)中有效。

我们已评估了完整氨基酸序列的公开资料，并发现H5血清型血凝素 (HA)病毒蛋白的HA1片段与火鸡Wisconsin 68菌株在氨基酸水平上的 序列同源性是100至83％同源。Swayne等(Vet Micro，2000，74：165-172) 的近期出版物已显示基于AIV疫苗的禽痘载体HA能够在AIV菌株的异 源型攻击试验中预防感染，所述AIV菌株包含与免疫疫苗相比具有87％ 或更高氨基酸同源性的HA1。该作者推断“与病原体HA1具有低于90％ 同源性的疫苗将很可能在AI攻击或野生病毒(field virus)从呼吸道散播 中导致不一致的降低”。

发明概述

本发明提供在动物或人中诱导抵抗禽流感病毒(AIV)菌株的免疫保 护性应答的方法，所述方法包括：

a)在植物细胞中表达核酸序列，表达产物包含已知HA1可变区多 肽的，所述已知HA1可变区多肽与攻击菌株HA1可变区多肽具有约70％ 到约90％的同源性；

b)使用在所述植物细胞中表达的已知HA1可变区多肽来制备疫苗 组合物，并；

c)对动物或人施用所述疫苗组合物，使得在所述动物或人中诱导保 护性免疫应答。

本发明还提供用于实施上述方法的载体、宿主细胞和新疫苗组合物。 此类疫苗组合物包含植物产生的已知HA1多肽序列，当向动物或人施用所 述HA1多肽序列时，其与攻击菌株相比以低于90％的同源性水平提供保 护性免疫。

序列简述

下面显示的是流感A/火鸡/Wisconsin/68的禽流感HA蛋白质序列。该 HA蛋白质含有568个氨基酸并显示5个不同结构域，所述结构域包括： 信号肽(氨基酸1-16)；片段H1的可变头区(氨基酸17-323[此处也称作 HA1])；片段H2的恒定碱基区(氨基酸324-527)；跨膜结构域(氨基酸 528-557)；和胞内硫酯脂类片段(氨基酸558-568)。

下面显示的是全长序列和上面鉴定的片段：

全长禽流感HA蛋白质(SEQ ID NO：1)：

MERIVIALAIISVVKGDQICIGYHANNSTKQVDTIMEKNVTVTHAQDILEKEHNGKLC

SLKGVRPLILKDCSVAGWLLGNPMCDEFLNVPEWSYIVEKDNPTNGLCYPGDFNDY

EELKYLMSNTNHFEKIQIIPRNSWSNHDASSGVSSACPYNGRSSFFRNVVWLIKKSNA

YPTIKRTYNNTNVEDLLILWGIHHPNDAAEQTELYQNSNTYVSVGTSTLNQRSIPEIA

TRPKVNGQSGRIEFFWTILRPNDAISFESNGNFIAPEYAYKIVKKGDSAIMRSELEYGN

CDTKCQTPVGAINSSMPFHNVHPLTIGECPKYVKSDKLVLATGLRNVPQRETRGLFG

AIAGFIEGGWQGMVDGWYGYHHSNEQGSGYAADKESTQKAIDGITNKVNSIIDKMN

TQFEAVGKEFNNLERRIENLNKKMEDGFLDVWTYNAELLVLMENERTLDFHDSYVK

NLYDKVRLQLRDNAKELGNGCFEFYHKCDNECMESVRNGTYDYPQYSEESRLNREE

IDGVKLESMGTYQILSIYSTVASSLALAIMVAGLSF WMCSNGSLQCRICI；

信号肽(SEQ ID NO：2)：MERIVIALAIISVVKG；

H1可变头区片段(HA1)(SEQ ID NO：3)：

DQICIGYHANNSTKQVDTIMEKNVTVTHAQDILEKEHNGKLCSLKGVRPLILKDCSV