[发明专利]T细胞测定

说明书

本发明涉及新T细胞测定方法，具体而言是其中通过除去调节T细胞 以增加对测试抗原的T细胞应答。本发明还涉及新测定法，其中为优化检 测T细胞应答，改变与抗原或其他样品孵育时间安排。具体而言，本发明 涉及用蛋白质样品的T细胞测定，其中使用多时间点测量T细胞增殖或细 胞因子释放，实现T细胞表位的优化检测。此外，本发明涉及为优化检测 T细胞表位，改变抗原与抗原递呈细胞(APC)或T细胞或APC和T细胞 二者孵育时间安排的T细胞测定。本发明尤其涉及用免疫调节性或毒性样 品的T细胞测定，所述样品直接影响APC、T细胞，或者APC和T细胞 二者。本发明特别用于测量对人类接触的药物、变应原、刺激物或其他物 质的人类T细胞应答。

T细胞测定提供了用于测量对抗原和其他样品的T细胞应答的有效方 法，尤其在人类中。这种测定被认为是“体外”测定，其中血样从供体中取 出并处理，使得血细胞原代培养物直接用于这种测定。对于肽和蛋白质样 品，体外人类T细胞测定已经用于检测人类T细胞表位，其有几个目的， 包括评估这种样品在人类中的潜在免疫原性(Jones等，J.Interferon Cytokine Res.，24卷(2004)p560-572)，确定蛋白质序列中T细胞表位然后 包含入疫苗，和确定蛋白质序列中T细胞表位然后除去以避免免疫原性 (Jones等，J.Interferon Cytokine Res.，24卷(2004)p560-572，和Jones等，J. Thromb.Haemost.，卷3(2005)p1-10)。当前的T细胞测定方法广泛包括了， 在测量T细胞应答前用APC和T细胞混合物孵育肽或蛋白质样品，或者 在测量T细胞应答前用APC孵育肽或蛋白质样品然后加入T细胞。在这 两种测定中，使用多个血样单独平行测试每个单独的肽或蛋白质样品，然 后通常在单一时间点测量T细胞应答。通常通过引入脉冲的放射性标记如 氚化胸腺嘧啶(3HTdR)到增殖性T细胞(“T细胞增殖”)，或者通过从激 活的T细胞释放细胞因子例如IL-2(“细胞因子释放”)，测量T细胞应答。

检测T细胞表位的当前T细胞测定方法受限于下述因素的一个或两 者：低灵敏度和/或由免疫调节性或毒性样品的干扰，所述样品抑制、刺激 或以其他方式改变APC、T细胞或者APC和T细胞二者。像这样，当前T 细胞测定方法可能不检测在某些肽和蛋白质样品中的一些或全部T细胞表 位，并可能不适用于测量对免疫调节性或毒性样品的T细胞应答，所述样 品包括肽和蛋白质样品、含有有机分子的非蛋白质样品、和蛋白质和非蛋 白质样品的制剂，其中所述制剂本身可以具有免疫调节性或毒性。

关于灵敏度，体外T细胞测定低灵敏度的主要原因可能与测定混合物 中因子有关，所述因子(包含细胞类型或测定培养物中因子)降低了对测 试抗原的T细胞应答，或由测试抗原或测试样品本身引起。体外T细胞测 定低灵敏度的进一步原因可能与对肽或蛋白质样品中T细胞表位的T细胞 应答的动力学有关，其中个体T细胞表位可在不同时间诱导T细胞应答。 对于其中使用单一时间点的T细胞增殖，加入某种样品后的T细胞增殖， 可能一方面在最初时快速，然后在加入脉冲放射性标记时下降，以致没有 明显增殖反应被检测。另一方面，T细胞增殖在加入某种其他样品后可能 在最初时(在加入脉冲放射性标记时)缓慢，使得没有明显增殖反应被检 测，即使接下来的增殖变得明显。对于其中使用单一时间点的细胞因子释 放，加入某种样品后的细胞因子产生，可能一方面在最初时快速，但这些 细胞因子可能接下来被测定混合物中的细胞消耗，使得在单一测定时间点 没有明显细胞因子可检测得到。另一方面，细胞因子释放可最初时缓慢， 使得在单一测定时间点没有明显增殖反应检测得到，即使接下来的细胞因 子释放变得明显。增殖或细胞因子释放的动力学可被一系列因素影响，例 如在不同血样间T细胞应答中的同种异型差异、APC摄取和处理的效率和 动力学、APC中肽或蛋白质样品的蛋白水解效率、肽或蛋白质样品中T细 胞表位的强度和频率、T细胞表位对特定II类MHC同种异型的亲和力、 T细胞受体对肽-II类MHC复合物识别效率、共刺激细胞表面分子的频率 和浓度、共刺激细胞因子的浓度、测定混合物中其他细胞例如CD8⁺T细 胞或抑制性T细胞的刺激、记忆T细胞的存在和一些样品(例如小肽)直 接加载到APC表面表达的II类MHC分子上的能力。