[发明专利]嵌合腺病毒载体

说明书

相关申请的交叉引用 

本申请要求下述美国临时专利申请的优先权：于2006年2月28日提交的美国临时专利申请No.60/778026，于2006年5月19日提交的美国临时专利申请No.60/801,645，于2006年5月22日提交的美国临时专利申请60/802,992，于2006年8月4日提交的美国临时专利申请No.60/821,492，于2006年9月22日提交的美国临时专利申请60/846,658以及于2006年9月28日提交的美国临时专利申请No.60/848,195)，为了所有的目的，其公开内容整体通过引用并入本文。 

关于在联邦政府资助的研究开发中产生的发明的权利的声明 

不适用 

发明背景 

疫苗是用于预防和/或治疗大量疾病和病症(例如，病毒感染、细菌感染和癌症)的重要手段。基于核酸的疫苗具有超过蛋白或减毒活疫苗的若干优势。表达抗原的核酸向靶细胞的导入使得针对目的抗原产生免疫反应的疫苗快速开发。对于蛋白疫苗，当每次产生了新的疫苗时都需要开发有效且高效的蛋白纯化方法。对于活疫苗，需要确定减毒作用的方法没有完全阻止病原体的生长，也要证明其在人体内是完全安全的。蛋白纯化和减毒作用的方法学的开发是极其费时的过程。相反，大部分基于核酸的疫苗每次使用相同的生产工艺就能够被很快地生产出，仅仅在编码目的抗原的核酸中有快速变化。复制缺陷型腺病毒是基于核酸的疫苗系统，其快速地、可预料地和廉价地以高效价被制备[Polo，J.M.and Dubensky，T.W.，Jr.，Drug Discov Today，7(13)，719-727(2002)]。然而，给予本领域已知的腺病毒载体后抗原特异性反应的效率是低的。因此，在本领域中需要能够高效地激发针对目的 抗原的免疫反应的新腺病毒载体。本发明满足这些和其它需要。 

发明概述 

本发明提供了包含编码异源多肽的核酸的嵌合腺病毒载体，以及激发对异源多肽的免疫反应的方法。 

本发明的一个实施方案提供了包含表达盒的嵌合腺病毒表达载体，所述表达盒包含：(a)可操作地连接于编码toll样受体(TLR)-3激动剂的核酸的第一启动子；和(b)可操作地连接于编码异源多肽的核酸的第二启动子。在一些实施方案中，所述TLR-3激动剂是dsRNA。在一些实施方案中，所述编码TLR激动剂的核酸包含选自SEQ ID NOS：3、7、8、9、10、11和12的序列。在一些实施方案中，所述异源多肽选自HIV包膜多肽(例如，gp41、gp120或gp160)和流感HA多肽。在一些实施方案中，所述第一和第二启动子是相同的。在一些实施方案中，第一和第二启动子是不同的。在一些实施方案中，所述启动子选自β肌动蛋白启动子和CMV启动子。本发明还提供了包含表达载体的免疫原性组合物。 

本发明的另一实施方案提供了通过给予哺乳动物个体(例如，诸如小鼠、大鼠或豚鼠的啮齿类动物，或诸如黑猩猩、猕猴或人的灵长类动物)免疫原性有效量的组合物，以激发对异源多肽的免疫反应的方法。在一些实施方案中，所述载体通过任何一种非胃肠外途径(例如，经口、经鼻或粘膜)给药。在一些实施方案中，所述异源多肽在选自树突细胞、微褶细胞和肠上皮细胞的细胞中表达。 

本发明的另一实施方案提供了免疫原性组合物，其包括：(a)包含可操作地连接于编码异源多肽的核酸的启动子的嵌合腺病毒表达载体；和(b)TLR-3激动剂(例如，dsRNA)。在一些实施方案中，所述TLR-3激动剂由核酸编码。本发明还提供了通过以任何非胃肠外途径(例如，口腔、经鼻、粘膜)给予哺乳动物个体(例如，诸如小鼠、大鼠或豚鼠的啮齿类动物，或诸如黑猩猩、猕猴或人的灵长类动物)所述组合物，以激发免疫反应的方法。 

本发明的另一实施方案提供了包括在SEQ ID NOS：1、2、6、7、 13、14、15、16或17中提及的序列的分离的核酸。