[发明专利]使用硬骨鱼胚胎筛选具有血管调节活性的试剂的方法

权利要求书

1、用于筛选血管发生调节活性试剂的生物学方法，包括分等级 的3个层次的生物筛选测定系统：

a.筛选血管发生调节活性；

b.试剂和终点之间的剂量-反应关系；

c.确定器官特异性毒性和靶特异性效应。

2、权利要求1的方法，其中优选的硬骨鱼是斑马鱼。

3、权利要求1的方法，其中硬骨鱼是受精卵、胚胎、幼苗或幼 体。

4、权利要求1的方法，其中该方法包括在容器中将一定数量的 硬骨鱼暴露于各种浓度的试剂的测定。

5、权利要求1的方法，其中向培养基中添加试剂的最早时间和 最晚时间分别是受精后4小时和受精后20小时。

6、权利要求1的方法，其中步骤(a)包括显示和分析硬骨鱼中 的血管系统模式的方法。

7、权利要求6的方法，其中在受精后3-5天之间检查硬骨鱼。

8、权利要求6的方法，其中可通过在固定的硬骨鱼中用颜色底 物或荧光底物染色内皮细胞显示血管系统模式。

9、权利要求6的方法，其中也可通过将荧光底物注射到活的硬 骨鱼的循环系统内显示血管系统的模式。

10、权利要求6的方法，其中分析策略是通过计数从头到尾或者 特定的区域，例如尾部区的节间血管的数量实施。

11、权利要求1的方法，其中步骤(b)包括确定在至少一天的 暴露时间中不同浓度的试剂对硬骨鱼的副作用的方法。

12、权利要求11的方法，其中副作用包括死亡和畸形。

13、权利要求12的方法，其中畸形是硬骨鱼的外部形态学的改 变。

14、权利要求11的方法，其中没有观察到副作用的浓度(NOAEC) 是在试剂和副作用之间的剂量-反应关系中计算的。

15、权利要求1的方法，其中在步骤(c)中，在不诱导任何副作 用的浓度，即：NOAEC，水平测定器官特异性毒性和靶特异性效应。

16、权利要求15的方法，其中暴露的时间是至少24小时。

17、权利要求15的方法，其中包括测量靶器官的大小和形状的 方法。

18、权利要求17的方法，其中器官和靶通过器官特异性底物显 示。

19、权利要求18的方法，其中器官特异性底物是荧光。

20、权利要求17的方法，其中定量确定3D大小和形状。

21、权利要求15的方法，其中进一步包括确定试剂对硬骨鱼的 细胞毒性的方法。

22、权利要求21的方法，其中在大量硬骨鱼，即每个浓度至少 100个硬骨鱼中，确定死亡细胞的发生率。

23、权利要求15的方法，其中进一步包括确定试剂的心脏毒性 的方法。

24、权利要求23的方法，其中硬骨鱼处于至少在受精后48小时。

25、权利要求23的方法，其中待测量的参数是心率和心脏搏动 节律性。

26、权利要求23的方法，其中待测量的区域是尾部循环。