[发明专利]用于血红蛋白定量确定的方法和系统

说明书

技术领域

本发明涉及一种分析方法，以及用于执行这种分析的系统。具体地，本发明涉及用于确定未改变全血中血红蛋白的方法和可用于该确定的系统。 

背景技术

早在美国专利4,088,448中公开了一种用于液体采样、将样品与试剂混合和直接对与试剂混合的样品进行光学分析的一次性试管。这种已知的试管具有若干优点，如：它尤其简化了取样过程，减少了器皿的数量，和通过使分析过程不受进行分析的操作者的操作技术影响而显著提高分析的准确性。在美国专利5,674,457中公开了基于相同原理且流动特性得到提高的试管结构。 

根据这些专利开发的一次性试管目前广泛用于未稀释全血中血红蛋白的测量(Hb确定)。为此，要用试剂对试管腔进行预处理，以便当将血液样品引入试管时，红细胞(red blood cell)壁被分解并且引发化学反应。反应的结果使得可直接经试管的透明壁进行吸收测量而进行Hb确定，所述试管在也被称为光学窗的测量区域具有预定且精确定义的相对平面壁的内表面间距。测量方法是基于Vanzetti，G.的“An azide-methaemoglobinmehod for haemoglobin determination in blood”，Am.J.Lab.&Clin.Med.67，116-126(1996)中的改进的叠氮高铁血红蛋白(azidmethemoglobin)法。 

分光光度测量在570和880nm上进行。这种基于干式化学的定量测量方法已取得巨大成功，这可以在例如von Schenck，H.、Falkensson，M.和 Lundberg，B.发表于Clinical Chemistry，32卷，No3，pages526-529，1986的文章“Evaluation of‘HemoCue’，a new device for determining hemoglobin”中看出，因为与确定Hb的标准湿法得到的结果相比，该方法得到相同或者甚至更好的结果。所使用的试剂包括溶血红细胞的脱氧胆酸钠、将血红蛋白转换为叠氮高铁血红蛋白的叠氮化钠和硝酸钠。 

由于所使用试剂的吸湿性，所以其贮藏期有限且要求将试管贮藏于含有干燥剂的密封包装内。甚至更麻烦的是这样的事实，即在高湿度气候中，试管必须在去除包装后的几分钟内使用，否则试剂将被破坏并且测量将不准确并因此无效。 

然而，由所用试剂的吸湿性引起的问题可以消除，因为已发现：不一定非要使用这些试剂，正如在美国专利6,638,769中公开的那样，根据该专利，在490至520nm的波长范围内直接对微量试管中的样品进行首次吸收测量。然而，根据该专利申请中所公开的发明，需要在进行测量之前对血液溶血。因此，试腔必须包含用于分解红细胞并释放这些细胞中所包含的血红蛋白的溶血剂。在对血液样品中的血红蛋白进行光度吸收测量时使用溶血剂的必要性也公开于例如美国专利5,064,282(Artel)中。 

在不使用溶血剂的情况下定量光学确定全血中血红蛋白的方法是已知的，但这些方法的共同之处在于它们都相当复杂。这首先取决于由于存在高浓度的红细胞而引起的血液不均匀性，其结果是光因与这些不均匀的血液样品微粒相互作用而被散射。因此，光不是直接穿过样品而是在一定散射角范围内被偏转。引起问题的另一因素是血液可含有多达5种的不同种类的血红蛋白的事实。解决这些问题的专利公开例如有美国专利6,262,798(Shepherd)和WO01/53806(Radiometer)。 

根据美国专利6,262,798所公开的发明，为实现准确测量需要用到多个波长。需要多个波长使得分光光度计相当复杂。波长的选择是根据它们以最小散射和最大吸收区分血红蛋白种类的能力。该专利还公开了可减少检测区域外散射的问题的大型检测器的使用。 

WO01/53806公开了一种特别适于对全血进行光学测量的装置。该装 置包括吸收滤光片或者干涉滤光片，其对检测器灵敏度和在不同散射水平观察到的有效光程长度的变化提供校正。该装置使用用于检测传播通过吸收滤光片或者干涉滤光片的散射光的大型检测器。