[发明专利]用于检测细胞及其它分析物的装置和方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2006年3月15日提交的美国临时申请No.60/782,470 的权益，这里通过引用结合进来。

发明背景

本发明涉及医疗器械、医学诊断和细胞计数领域。

在全球40,400,000感染HIV的人中，35,000,000以上生活在资源局 限性显著的发展中国家，他们中的许多迫切需要诊断、监测和抗逆转录 病毒的治疗。在管理HIV感染的对象时，对特定白细胞群体CD4+T淋 巴细胞的计数被证实为重要的生物学指标。在成人中，每微升血液中 CD4+T细胞的绝对数量具有关键的预断和治疗意义，并用于HIV分期 和治疗决策中。常规的CD4计数监测——每年两到四次——被推荐用于 所有的感染阶段。临床上，低于200个细胞mL^-1的CD4计数用以确诊 AIDS，并且在大多数情况下，被用作启动抗逆转录病毒治疗(ART)和 预防机会感染的标记物。较高的CD4计数阈值，即350和500个细胞 mL^-1被广泛用作增加监测强度的标记物，并在一些情况下用以启动 ART。然而，可以负担得起的和合适的用以确定CD4计数的实验室监测 工具在资源有限的情况下进入量很少，尽管国际社会在不断努力扩大 ART在这些地区的可获得性。

目前，CD4+T细胞计数的黄金标准是采用单克隆抗体和商用多用 途流式细胞计数仪或单用途CD4计数流式细胞计数仪对淋巴细胞亚群 的流式细胞计数法。尽管这些仪器通量高而准确，但其成本和对操作和 维护的技术需要限制了其普及并大大制约了HIV治疗项目在世界范围 内的资源局限地区实施。小型的仪器如Guava EasyCD4提供了有限的改 进而并没有被广泛地采用。非细胞荧光光度法，包括ELISA和胶珠式测 定法，被认为是CD4+T淋巴细胞定量的实用替代方式，因为这些方法 比流式细胞计数需要较少的设备并试剂成本低。然而，它们的通量低得 多，劳动集约性更大并且准确度较低，没有广泛使用或被世界卫生组织 指南所推荐。

此外，对CD4计数后端方面的改进——诸如设备小型化——并没有 解决资源局限情况下的最大问题，即样品制备。在诊断测定的任何步骤 中对静脉穿刺采集血液、裂解红细胞、离心样品或使用移液管的需要在 这些情况下成为极大的问题。

因此，仍然需要一种诊断和监测CD4细胞种群的低成本方法。

发明概述

本发明重点提供了一种用于从样品中分离目的细胞的方法，其通过 将所述样品引入含有对目的细胞具有特异性的结合部分的微流动装置， 使得样品中的目的细胞与所述结合部分结合，并向所述微流动装置施加 剪切应力以使目的细胞保持结合而非目的细胞不结合。在该实施方式 中，使目的细胞结合于所述结合部分的步骤和施加剪切应力的步骤可以 同时进行。

本发明还重点提供了一种用于从样品中分离目的细胞的方法，其通 过将所述样品引入含有对第一目的细胞具有特异性的第一结合部分的 微流动装置，其中所述第一结合部分置于第一腔室中。所述方法包括使 得样品中的第一目的细胞与所述第一结合部分结合，向所述微流动装置 施加第一剪切应力以使第一目的细胞保持结合而其它细胞不结合，并使 剩余样品流入含有针对第二目的细胞的结合部分的所述微流动装置第 二腔室中。该方法进一步包括使得样品中的第二目的细胞与所述第二结 合部分结合，并向所述第二腔室施加第二剪切应力以使第二目的细胞保 持结合而非目的细胞不结合。在该实施方式中，第一剪切应力和第二剪 切应力可以相同或不同。而且在该实施方式中，所述第一结合部分和第 二结合部分可以相同或不同。如上所述，所述应力可以在结合发生的同 时施加。

本发明还重点提供了用于分离目的细胞的试剂盒。该试剂盒包括装 置，其包含具有对目的细胞具有特异性的结合部分的腔室，和用于产生 剪切应力以使所述目的细胞优先于非目的细胞结合的泵。该试剂盒还可 以包括对目的细胞具有特异性的标记试剂。任选地，该试剂盒还可以包 括用于AIDS诊断的说明书。