[发明专利]与突变麦芽糖结合蛋白融合的靶蛋白的溶解和纯化

权利要求书

1.修饰的麦芽糖结合蛋白(MBP)，其包括：具有突变的MBP氨 基酸序列，其中所述突变使所述修饰的MBP，当融合于蛋白时，具有 以下至少一项的提高：(i)对麦芽糖糊精底物的结合亲和力；和(ii)当 蛋白具有有限溶解度时的溶解度。

2.根据权利要求1所述修饰的MBP，其中所述突变位于螺旋XI 和XII之间的铰链区或在所述蛋白的A313的10之内的区域。

3.根据权利要求1所述修饰的MBP，其中所述突变位于C结构域 或在S146的10之内的区域、在所述蛋白的β-折叠F的开端。

4.根据权利要求1所述修饰的MBP，其中所述突变为A313V。

5.根据权利要求1所述修饰的MBP，其中所述突变为S146T。

6.根据权利要求1所述修饰的MBP，其融合到靶蛋白以形成融合 蛋白。

7.根据权利要求6所述修饰的MBP，其中所述融合蛋白具有比与 所述靶蛋白融合的未修饰的MBP蛋白的溶解度更高的溶解度。

8.根据权利要求1所述修饰的MBP，其包括SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：6。

9.编码修饰的MBP的分离DNA，其包括：SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5。

10.包含根据权利要求9的DNA的载体。

11.用根据权利要求10所述的载体转化的宿主细胞。

12.根据权利要求11所述的宿主细胞，其中所述转化的宿主细胞 为转化的大肠杆菌宿主细胞。

13.根据权利要求11所述的宿主细胞，其中所述转化的宿主细胞 为转化的克鲁维酵母属宿主细胞。

14.根据权利要求11所述的宿主细胞，其中所述载体为pKIMF2。

15.纯化蛋白的方法，包括：

在宿主细胞中表达包含根据权利要求1所述的修饰的MBP和靶蛋 白的融合蛋白；

允许所述修饰的MBP融合蛋白结合到基质；和

在选定的缓冲液中从所述基质洗脱所述融合蛋白，以获得纯化蛋 白。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述基质是多糖。

17.根据权利要求15所述的方法，其中碳水化合物为麦芽糖糊精。

18.根据权利要求15所述的方法，其中所述修饰的MBP具有选 自A313V和S146T的突变。

19.根据权利要求15所述的方法，其中所述修饰的MBP包括SEQ ID NO：4。

20.根据权利要求15所述的方法，其中所述修饰的MBP包括SEQ ID NO：6。

21.根据权利要求15所述的方法，其中所述修饰的MBP由SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5编码。

22.根据权利要求15所述的方法，其中所述宿主细胞为克鲁维酵 母属或大肠杆菌。

23.溶解靶蛋白的方法，包括：表达与靶蛋白融合的修饰的MBP， 以便所述融合蛋白在体内被溶解到大于在不存在突变MBP的情况下可 观察到的程度，并且被溶解到大于使用非突变MBP所观察到的程度。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述修饰的MBP具有 A313V突变或S146T突变。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述修饰的MBP具有 A313V突变和S146T突变。