[发明专利]流感病毒的检测方法

权利要求书

1.一种快速检测包含血凝素和神经氨酸酶组分的流感病毒和/或病 毒颗粒的方法，所述方法包括以下步骤：

a)将病毒和/或病毒颗粒与支持物结合，该支持物包含至少一种类 型的选自天然或合成寡糖的碳水化合物受体，其与糖蛋白缀合或与其组 合，其中碳水化合物受体结合所述病毒和/或病毒颗粒的血凝素组分， 所述糖蛋白例如血型糖蛋白、α1-酸性糖蛋白、α2-巨球蛋白、卵类粘蛋 白及其组合；

b)使所结合病毒和/或病毒颗粒的神经氨酸酶组分与其带标记的酶 底物反应，产生可检测的信号；以及

c)检测步骤b)中所产生的信号。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述流感病毒和/或病毒颗粒 包括所有已知的禽流感(AI)亚型。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述流感病毒和/或病毒颗粒 包括某一亚型或一组亚型。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述流感病毒和/或病毒颗粒 包括高致病性变体。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述支持物是 层析纸或膜。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述碳水化合 物受体共价连接或物理吸附到所述支持物。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述碳水化合物受体包含 α2-3Gal基序。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中通过将含有病 毒和/或病毒颗粒的样品以点的形式加到所述支持物上(点印迹法)来 实现所述病毒和/或病毒颗粒的所述结合。

9.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中通过沿着所述 支持物浸入含有病毒和/或病毒颗粒的样品(侧流法)来实现所述病毒 和/或病毒颗粒的所述结合。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述神经氨酸 酶组分的所述带标记酶底物沉淀在所结合病毒和/或病毒颗粒的位置。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中用发色基团 标记所述酶底物，与所述神经氨酸酶的反应诱导了所述酶底物的颜色变 化。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述酶底物 是N-乙酰基神经氨酸的发色衍生物，特别是5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-N- 乙酰基神经氨酸。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中与所述神经 氨酸酶的反应诱导特定的荧光信号。

14.使用权利要求1至13中任一项的方法来快速检测流感病毒和/ 或病毒颗粒的检测系统，所述系统包括：

a)包含至少一种类型的选自天然或合成寡糖的碳水化合物受体的 支持物，其与糖蛋白缀合或与其组合，其中碳水化合物受体结合所述病 毒和/或病毒颗粒的血凝素组分，所述糖蛋白例如血型糖蛋白、α1-酸性 糖蛋白、α2-巨球蛋白、卵类粘蛋白及其组合；

b)与神经氨酸酶组分反应的带标记酶底物，从而产生可检测的信 号。

15.根据权利要求14所述的检测系统，其中所述支持物被封入带 有窗口的塑料盛放器中，以读取样品和阳性对照的测试结果。

16.根据权利要求14和/或15所述的检测系统，其中所述支持物 包含至少两种不同量的所述特异性结合物用于半定量估计样品中的病 毒含量。

17.根据权利要求14和/或16所述的检测系统，其中所述支持物 包含至少两种具有不同亚型特异性的特异性受体用于同时检测分属不 同亚型的病毒。

18.根据权利要求16至17中任一项所述的检测系统，其中在揭示 了具有目标特异性的病毒和/或病毒颗粒存在后，所述系统作为样品容 器和传送装置以用于确认性测试如逆转录聚合酶链式反应。

19.根据权利要求14至18中任一项所述的检测系统用于检测动物 和/或人的样品中、环境样品中的流感病毒和/或病毒颗粒的用途和/或作 为出现高致病性病毒亚型的早期预警系统的用途，所述动物和/或人的 样品例如拭样、粪便和血液。