[发明专利]流感病毒的检测方法

说明书

本发明涉及一种快速检测包含血凝素和神经氨酸酶组分的流感病 毒和/或病毒颗粒的方法，所述方法包括：通过特定的结合分子将所述 病毒和/或病毒颗粒与支持物结合，所述结合分子结合该病毒和/或病毒 颗粒的血凝素组分；以及通过将神经氨酸酶组分与其酶底物反应产生可 检测的信号来检测所结合的病毒和/或病毒颗粒。本发明还涉及应用本 发明的方法来快速检测流感病毒和/或病毒颗粒的检测系统以及根据本 发明的检测系统的用途。

所有禽流感(avian influenza，AI)病毒均为正粘病毒科中的A型流 感病毒，A型流感病毒的所有已知毒株均感染禽类。基于从中央的病毒 核心伸出的血凝素(H)和神经氨酸酶(N)蛋白，A型流感病毒又分 为若干亚型。存在16种H型和多达9种N亚型，由此产生了144种不 同的H和N组合的可能性。

禽流感(也称为bird flu、avian flu、A型流感病毒型流感、A型流 感或A类流感)是由某类流感病毒引起的流感，该流感病毒以禽类为宿 主但是可能感染若干种哺乳动物。

流感大流行即流感病毒的大规模流行，如1918年的西班牙流感。 世界卫生组织(WHO)发出警告说，在未来几年中存在流感大流行的 危险。其中最有可能发生的是A(H5N1)亚型禽流感。

H5N1是一种已通过抗原性漂移突变为几十种高致病性变体的禽流 感病毒，然而目前均属于H5N1禽流感病毒的Z基因型。Z基因型是在 2002年从H5N1的早先高致病性基因型通过重配出现的，所述早先 H5N1高致病性基因型最早在禽类(中国，1996年)和人类(香港，1997 年)中被发现。来自人类感染者的H5N1病毒以及2004和2005年分离 的密切相关的禽病毒属于一个基因型，其常被称作Z基因型。

已在人类中证实的禽流感亚型按照已知的死亡人数排序为：导致西 班牙流感的H1N1、导致亚洲流感的H2N2、导致香港流感的H3N2、 H5N1、H7N7、H9N2、H7N2、H7N3、H10N7。

为了在能够人际传播的突变的强致病性新流感毒株出现时可以迅 速应对，需要快速且可靠的测试方法来确定动物或人是否被该病毒感 染。目前用于检测来自环境、动物和患者样品之病毒的实验室方法既费 力又耗时。

US-B-6,503,745公开了环戊烷和环戊烯化合物及其在检测流感病毒 的方法中的用途。使用胎球蛋白包被的表面来捕获病毒，并用结合神经 氨酸酶的带标记化合物来进行检测。

D.E.Noyola等在Journal of Clinical Microbiology，2000，第1161- 1165页中报道了用胎球蛋白包被的珠子。胎球蛋白也作为神经氨酸酶的 底物，并利用凝集作用来进行检测。

US-A-2003/0129618公开了使用响应于分析物选择性结合聚合材料 而在聚合物材料中出现的荧光来检测分析物的方法和组合物。具体来 说，该发明允许对膜改性反应(membrane modifying reaction)以及负 责此改性的分析物进行荧光检测，并允许筛选作用抑制剂。

所有已知且可取的快速现场方法(on-site approach)均基于病毒表 位的抗体的应用或者基于简单的神经氨酸酶(NA)检测。基于侧向流 动技术(lateral flow technique)或其它类型测定的抗体方法的主要缺 点是抗体试剂不稳定。另外，到目前为止，大多数可用的免疫测定表现 出对A型流感而非H5N1的特异性。另外，使用抗体不可避免地导致检 测成本的增加。

特异性针对流感病毒的NA检测的主要缺点是必须使用本领域中所 用的昂贵底物试剂，该试剂需要被部分甲基化。

本发明通过提供如权利要求中所限定的一种用于快速检测流感病 毒和/或病毒颗粒的方法、应用所述方法的检测系统以及所述检测系统 的用途而解决了这些问题。

说明书中将使用以下缩写：3’SLN＝Neu5Acα2-3Galβ1-4GlcNAc； HA＝血凝素；HAR＝血细胞凝集反应；LOD＝检出限；NA＝神经氨酸 酶；TCID＝组织培养感染量；TN缓冲液＝含有0.1M NaCl的0.02M tris-HCl(pH7.2)。

根据本发明，应用了一种快速检测流感病毒和/或病毒颗粒的方法， 该方法包括以下步骤：