[发明专利]产生转基因动物的组合物和方法

说明书

发明领域

本发明提供了改变胚的基因表达的方法，以提供有效产生转基因动物的组合物和方法。特别是，本发明提供了通过直接注射核酸分子到动物中，以产生种系转基因动物的组合物和方法。

背景技术

通常经过显微注射目标DNA或基因到受精的卵细胞中，通过移植稳定转染的体细胞细胞核到去核的卵细胞中，或通过稳定转染胚胎干(ES)细胞和注射ES细胞到胚囊-胚中，然后再植入注射的卵细胞，细胞核移植的卵细胞，或注射胚囊胚到假孕的受体雌性的子宫中，来产生转基因动物。这种方法是很复杂的，费时的而且昂贵的。

较容易的，更有效的，而且花费较少的产生转基因动物的方法是需要的。另外，一些动物类型不能使用已知的方法进行转基因修饰。因此，容许产生不同的转基因动物类型的新方法是需要的。

发明概述

本发明提供了有效产生转基因动物的组合物和方法。特别是，本发明提供了通过直接注射核酸分子到动物中，以产生种系转基因动物的组合物和方法。

在一些实施方案中，本发明提供了简单，快速，而且低成本的用于产生转基因动物的方法。例如，在一些实施方案中，待转染的DNA通过静脉注射施用给动物。虽然DNA的静脉内传递广泛用于动物中的基因表达和调节，但是还没有报道种系(例如，游离型和/或染色体)转基因的产生。实际上，以前的研究表明，静脉内传递DNA到怀孕的小鼠中不能产生种系转基因。相反，本发明的组合物和方法，提供了种系传送，并容许产生携带和表达目标转基因的后代(例如，F1，F2，等等)。

在一些实施方案中，施用目标DNA而不利用转染试剂载体，但是本发明不限于此。这是相对应用脂质体或其他载体的方法。在一些实施方案中，目标DNA用合适的核酸载体，例如，脂质体，DEAE-葡聚糖，阳离子脂质，磷酸钙或DNA转染领域技术人员已知的其他载体施用。

在一些实施方案中，通过个体动物的尾静脉而静脉内施用DNA，但是本发明不是如此有限。在一些实施方案中，DNA施用可能涉及注射到另外的静脉(例如，不是尾静脉)，动脉，或注射到与静脉，动脉，毛细管或淋巴结邻近的组织。在一些实施方案中，通过如O′Shea等，J.Biomed.Biotechnol.，18657(2006)中描述的技术进行施用。

在一些实施方案中，将DNA施用给怀孕的个体，以便它们具有转基因的后代能将转基因传代给下一代。在一些实施方案中，怀孕的个体处于怀孕初期阶段。

本发明不受动物性质的限制。在一些实施方案中，动物是啮齿类动物(例如，小鼠，老鼠，豹鼠，草原土拨鼠，松鼠，河狸，北美地鼠，仓鼠，田鼠，沙鼠，豪猪，豚鼠，等等)。在一些实施方案中，动物是家畜动物(例如，猪，牛，山羊，鹿，绵羊，牦牛，等等)。在一些实施方案中，动物是陪伴动物(例如，猫，狗，等等)。在一些实施方案中，动物是灵长类动物(例如，狐猴，猴，猿，人，等等)。在一些实施方案中，动物是有袋动物(例如，袋鼠，opposums，负鼠，袋熊，bettongs，鼹鼠，等等)。在一些实施方案中，动物是非人动物(例如，非人哺乳动物)。

本发明也不受提供的DNA的性质限制。在一些实施方案中，DNA以质粒，线性构建体(例如，具有偶数末端，奇数末端，或修饰的末端如哑铃形末端的构建体(Wooddell等，2005，Biochem.Biophys.Res.Comm.334：117，以其全部内容引入这里作为参考))，表达载体，病毒序列(例如，腺病毒序列，慢病毒序列)，等等。在一些实施方案中，DNA包括基因表达增强子序列，绝缘体序列，支架/基质着丝缢痕(S/MAR)(参见，例如，Conese等，Gene Ther.，11：1735(2004)and Tetko等，Plos Comput.Biol.2：e21(2006)，以其全部内容引入这里作为参考)，等等，无论是天然的或人工的，以及功能等效的任何序列。在一些实施方案中，DNA编码目标基因(例如，标记基因，治疗基因，siRNA，蛋白或肽片段，miRNA，shRNA，免疫球蛋白，等等)。在一些实施方案中，提供了许多不同的转基因(例如，在一个或多个不同的载体中)。在一些实施方案中，DNA包括重组序列(例如，容许同源重组到基因组DNA中的序列)。例如，在一些实施方案中，DNA包括容许通过Cre/lox系统，flp重组酶系统，或其他的重组酶系统进行重组的一个或多个序列。