[发明专利]载脂蛋白指纹图谱技术

说明书

本发明的背景

我们，艾米丽塔·德·古兹曼·布雷耶(Emelita De Guzman Breyer)，一个居住在美国佐治亚州30084，塔克(Tucker)，利弗西街(LiveseyTrail)2840的美国公民，和玛丽·K.·罗宾逊(Mary K.Robinson)，一个居住在美国佐治亚州30034，迪凯特(Decatur)，樱桃山(Cherry HillPlace)3649的美国公民，发明一种针对载脂蛋白指纹图谱技术及其相关方法的新的、有益的改进，以下是其说明书。

交叉引用及优先权

本申请根据专利合作条约要求优先权，要求的优先权文件：美国临时专利申请，发明名称为：载脂蛋白指纹图谱技术(APOLIPOPROTEIN FINGERPRI NTING TECHNIQUE)，申请日：2006年3月23日，发明人代表：艾米丽塔·德·古兹曼·布雷耶(EmelitaDe Guzman Breyer)和玛丽·K.·罗宾逊(Mary K.Robinson)，申请号：No.60/743,678。

背景技术

I发明的技术领域

本发明的技术领域涉及生物样本和临床样本中载脂蛋白(apolipoproteins)的组成、分析及其定量。尤其是，本发明涉及在人血浆、血清和脂蛋白级分中的载脂蛋白的指纹识别、绘制谱图(profiling)、检测和/或定量的方法、技术及方案。

II相关技术的描述

众所周知，载脂蛋白、脂蛋白的蛋白组分，能溶解疏水性脂质和促进细胞定位及运输。这些组分在肝脏和小肠中合成，可以维持脂蛋白颗粒的完整性，作为酶的辅助因子与脂蛋白发生作用，并促进受体介导的交互作用，消除脂质的循环。

载脂蛋白包括如下几组：A(载脂蛋白A)、B(载脂蛋白B)和C(载脂蛋白C)和E(载脂蛋白E)。其中，A、B和C三组的每种组分由两个或两个以上不同的蛋白质组成。载脂蛋白A包括：载脂蛋白A1、载脂蛋白A11、载脂蛋白AIV、和载脂蛋白AV；载脂蛋白B包括：载脂蛋白B48和载脂蛋白B100；载脂蛋白C包括：载脂蛋白CI、载脂蛋白C1i、载脂蛋白CII和载脂蛋白CIV。载脂蛋白CI、CII、CIV和载脂蛋白E各包含两个或两个以上的同种型(isoform)。载脂蛋白在不同的疾病和健康状态下存在不同的功能。

载脂蛋白CIII是人体中的79个氨基酸的蛋白质，它具有三种不同的苏氨酸-74糖基化同种型。CIII-0型同种型是在缺乏唾液酸、半乳糖和半乳糖胺残基时唾液酸酶反应的终产物，占同种型总量的14％。CIII-0型同种型是极低密度脂蛋白(VLDL)结合到脂解激活受体的抑制剂，这是一个在血浆中清除高甘油三酸酯脂蛋白的重要路线。CIII-0型同种型与极低密度脂蛋白存在最低亲和力。CIII-1型同种型含有1摩尔的唾液酸并且占同种型总量的51％。CIII-2型同种型是在肝脏中合成和分泌的原始类型的CIII，含有2摩尔的唾液酸，占同种型总量的35％。CIII-2型同种型与极低密度脂蛋白具有较高的亲和力，是抑制极低密度脂蛋白结合到脂解激活受体的较弱抑制剂。

目前用来鉴别及定量CIII同种型的方法包括：在血浆中分离脂蛋白成分，对这些成分脱脂化(delipidation)，并从载脂蛋白的水溶性组分中纯化CIII。虽然，不同的纯化同种型都可以通过等电聚焦电泳、质谱和荧光波谱及吸收波谱等方法检测。但目前的方法不足是从血浆中单独分离CIII，只有60-80％的蛋白被复性，并且在目前的方法中，为临床诊断血浆中的CIII，例如酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫检测中，只能检测总的CIII。

然而，CIII同种型基于以下几个原因而具有重要的临床意义。该同种型的变化曲线与糖尿病患者的血糖控制相关。例如，高糖化血红蛋白直接与高CIII-0水平相关。患有高甘油三酯的患者在极低密度脂蛋白中CIII的CIII-2型同种型的百分比会增加。当女性的热量严重缺乏时，尽管总的CIII维持正常水平，但其中CIII-2水平会增加。CIII-2的变化与极低密度脂蛋白甘油三酯的变化正相关，而CIII-1的变化与极低密度脂蛋白甘油三酯的变化负相关。现有技术对准确的定量和检测CIII同种型的局限性，虽然对了解脂质代谢过程具有十分重要的意义，但它们在不同代谢过程的作用仍有疑义。