[发明专利]由纤维素、热纤梭菌细胞以及由这些细胞表达的纤维素酶形成的三元复合物介导的水解纤维素的方法

权利要求书

1.利用降低的纤维素酶负荷来水解纤维素底物的方法，该方法包 括：

确定在一段时间内接近完全地水解一定量纤维素底物所需的纯化 的纤维素酶的量；

将纯化的纤维素酶的量降低2至5倍，从而确定降低的纤维素酶 负荷；以及

将表达与所述降低的纤维素酶负荷浓度相同的细胞结合纤维素酶 的微生物在基本上无氧的气氛下以及足以使所述纤维素底物接近完全 水解的所述一段时间引入所述纤维素底物，其中所述微生物为热纤梭 菌(Clostridium thermocellum)。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述倍数为2.8至4.8。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述纤维素底物选自草、制糖 残余物、农业废弃物、干草、林业废弃物、反刍动物消化产物、城市废 物、造纸厂废水、报纸、纸板或其组合。

4.利用降低的纤维素酶负荷来水解纤维素底物的方法，包括：

确定在一段时间内接近完全地水解一定量纤维素底物所需的纯化 的纤维素酶的量；

将纯化的纤维素酶的量降低2至5倍，从而确定降低的纤维素酶 负荷；和

将已设计为表达发酵剂结合纤维素酶的发酵剂在合适的条件下以 及足以使所述纤维素底物接近完全水解和发酵的一段时间引入所述纤 维素底物，

其中所述发酵剂结合纤维素酶与所述降低的纤维素酶负荷的浓度 相同，并且其中所述发酵剂选自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiea)、运 动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、产酸克 雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)、丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)、 粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、白色念珠菌(Candida albicans)、产乳糖酶酵母(Kluyveromyces lactis)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、木糖发酵酵母(Pichia stipitis)、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、红发夫酵母(Phaffia rhodozyma)、产朊假丝酵母(Candida utilis)、Arxula adeninivorans、汉逊德 巴利酵母(Debaryomyces hansenii)、多形德巴利酵母(Debaryomyces polymorphus)和西方许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)，

其中所述发酵剂被设计为表达纤维素酶或在细胞表面表达纤维小 体，并能形成纤维素-酶-微生物复合物。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述倍数为2.8至4.8。

6.如权利要求4所述的方法，其中所述纤维素底物选自草、制糖 残余物、农业废弃物、干草、林业废弃物、反刍动物消化产物、城市废 物、造纸厂废水、报纸、纸板或其组合。