[发明专利]针对重组MUC1的适体

说明书

发明领域

本发明涉及适体的产生，所述适体识别MUC1肿瘤标记的糖基化和非 糖基化形式，涉及该适体本身，并涉及包括所述适体的应用和方法。

发明背景

癌症是世界上最主要的致病原因。多年来已经对疾病特有分子的鉴定 进行了研究。发现许多分子是肿瘤中独特的，或在癌症中过表达、改变或 另外不同。在针对癌症诊断和治疗的许多免疫学方法中，使用这样的肿瘤 标记作为靶标。

MUC1蛋白是一种这样的标记，已知其在恶性细胞中过表达。这种上 皮黏蛋白由MUC1基因编码。它不是典型的细胞外复合黏蛋白，诸如发现 作为覆盖胃-肠和呼吸道的粘膜层主要成分的那些，但是它是跨膜分子，其 由大多数腺上皮细胞表达。该蛋白质由许多不同的区域组成，包括具有推 定信号肽和简并的串联重复的N-末端、跨膜区和C-末端细胞质尾部。该 蛋白质的主要部分是串联重复区。其由独特的肽序列 APDTRPAPGSTAPPAHGVTS的简并重复组成。重复的数量随等位基因而 变化，由此使得该基因和蛋白质是高度多态的。MUC1还称为MUC-1、 黏蛋白1、muc-1、上皮唾液蛋白、花生-反应性尿黏蛋白(PUM)、多态上 皮黏蛋白(PEM)、CD227、上皮膜抗原(EMA)、DF3抗原和H23抗原。

MUC1黏蛋白通过与微丝网络的相互作用而被限制在顶端细胞的表 面。尽管MUC1由正常的腺上皮细胞广泛表达，但是当细胞变为恶性时， 该表达明显增加。已有文件充分记录了在乳腺癌和卵巢癌，以及一些肺癌、 胰腺癌和前列腺癌中的这种情况。近期，还显示出MUC1是有价值的膀胱 癌标记，并在许多研究中已用于膀胱癌的诊断。抗体研究还显示出不仅 MUC1在癌中过表达，而且糖基化模式也被改变。因此，在乳腺癌黏蛋白 中，糖基化的变化导致核心蛋白中的某些表位被暴露出来，所述表位被遮 盖在由泌乳的乳腺产生的黏蛋白中。多年来，已经在许多免疫治疗方法中 探究了MUC1的这些特征，所述方法主要包括针对乳腺癌和膀胱癌的放射 性标记抗体。还在动物模型中进行了对基于MUC1的活性特异性免疫治疗 的其他尝试，从而研究基于MUC1的免疫原的功效。

这些免疫治疗方法具有一些鼓舞人心的结果，且引起针对疫苗治疗和 抗体治疗这两者的临床试验。然而，这些策略不是没有问题的。放射性标 记抗体技术仅限于适度的(毫居里)放射剂量，因为放射性标记抗体的长 循环时间使得骨髓毒性成为一个问题。另一个问题是产生特异性单克隆抗 体所需的时间周期。另外，近期试图使用肽代替抗体造成了对MUC1黏蛋 白具有非常低的亲和性的分子。

国际专利申请WO2004/081574描述了针对合成的MUC1肽的适体的 产生。该公开物描述了产生这样的适体，即，所述适体靶向由3个拷贝的 重复序列APDTRPAPGSTAPPAHGVTS(SEQ ID NO：12)组成的60-mer肽 或靶向该序列中包含的9个氨基酸的肽APDTRPAPG(SEQ ID NO：13)。虽 然该方法可以产生有用的适体，但是备选方法可以用于产生针对MUC1 肽的不同表位的适体是可能的。此外，已知癌中MUC1的体内糖基化模式 改变，以致针对非糖基化合成肽的适体不能与针对肿瘤-糖基化MUC1蛋 白所产生的备选适体一样有效地与所述肽结合。

本发明努力利用鉴定基于重组MUC1蛋白的适体而克服或减少至少这 些问题中的一些。在优选的实施方案中，已通过与自然界中使用的方法类 似的方法，对该重组蛋白进行了糖基化，从而为接近我们的适体工作(例 如作为体内的治疗剂或诊断剂)的体内条件，提供更高水平的改进。

与基于识别MUC1的抗体的现有发明相比，本发明的优势在于所述适 体提供针对MUC1靶蛋白的更高特异性和更强结合，由此在溶液中识别该 蛋白质时变得更灵敏，由此在目前的诊断测定中提供显著降低肿瘤标记识 别水平的潜力，导致更灵敏的测定，以此提供更好的预后/早期诊断价值。 此外，当作为治疗剂与抗体相比较时，适体提供很小的或无免疫原性、更 好的肿瘤渗透性、通过肾和尿的快速清除和一段时间后的天然降解。