[发明专利]融合伴侣细胞

说明书

技术领域

本发明涉及融合伴侣细胞(fusion partner cell)以及杂交瘤。 

背景技术

杂交瘤(融合细胞)被用于利用培养细胞的物质生产中。动物细胞中产生商业上或学术上有用的物质的细胞也很多。但是，一般来说，动物细胞的培养是困难的，在维持物质产生能力的同时长期稳定地培养动物细胞的技术还未确立。于是，提出了下述技术：将在生物体外能够永久地进行稳定的培养的骨髓瘤制成融合伴侣细胞，通过使融合伴侣细胞与产生生理活性物质的细胞发生融合而制成杂交瘤，从而制作出具备培养能力和物质生产能力这两种特性的细胞。 

使用细胞融合法的单克隆抗体如下生产：对杂交瘤所产生的抗体的产生量和结合性等性质进行试验，将所选的细胞单一化，然后使细胞增殖，制作出均匀的细胞群体，从而生产单克隆抗体。这些杂交瘤在体外或体内(以腹水的形式)进行培养增殖，为了抗体的大量生产而扩张。用于开发使用细胞融合法的单克隆抗体的方法是已知的(参照非专利文献1)。单克隆抗体与从抗血清中精制的多克隆抗体相比特异性地优异，在各种免疫学分析方法中成为重要的工具。 

细胞融合在同种细胞间进行时仅称作杂交瘤。一般来说，小鼠的单克隆抗体等通过该方法来制作。与此相对，将由某个种类中分离出来、且与来自其他种类的永生化细胞发生融合而成的抗体产生细胞称作异种杂交瘤。所谓异种杂交的用语与异种间融合以同种意义使用，所制作出的细胞称作异种杂交瘤。进而，如果是融合三种动物种来源的细胞而成的抗体产生细胞，则也可称作三体瘤(trioma)。利用该方法制作的单克隆抗体为大鼠或仓鼠的抗体，使小鼠来源的骨髓瘤细胞与预先投予了预定抗原的大鼠或仓鼠的淋巴细胞融合，从而制作小鼠×大鼠或者小鼠×仓鼠的异种杂交瘤。如此获得的异种杂交瘤经过克隆而获得各种免疫动物来源的单克隆抗体。

目前为止，有关于制作人、兔、牛、羊的单克隆抗体的异种杂交瘤的报道(参照非专利文献2～5、专利文献1、2)。 

但是，利用异种杂交瘤进行的单克隆抗体的制作随着进行融合的细胞的生物学系统的种间距离越远，则越难以产生抗体。例如，在小鼠×兔或者小鼠×人的杂交瘤中，抗体的产生是极其困难的。杂交瘤由于异常的染色体数，并不总是将同样的染色体对分离给子细胞，有时也会失去这些染色体。 

非专利文献1：Waldman，T.，Science 252：p1657-1662(1991) 

非专利文献2：Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)80：p7308-7312，1983 

非专利文献3：Raybould等，Science 240：p1788-1790，1988 

非专利文献4：Kennedy等，J.Gen.Virol.69：p3023-3032，1988 

非专利文献5：Flynn等，J.Immunol.Methods 121：p237-246，1989 

专利文献1：美国专利第4634664号说明书 

专利文献2；美国专利第4977081号说明书 

发明内容

本发明的目的在于提供在广范围的动物种中能够更容易地应用利用杂交瘤的稳定的物质生产的技术。具体地说，本发明的目的在于提供对杂交瘤的制作有用的新型融合伴侣及其制作方法。或者，本发明的目的在于提供通过由本发明获得的融合伴侣与物质生产细胞的融合而获得的杂交瘤、其制造方法、以及利用该杂交瘤的物质生产方法。 

利用了细胞融合技术的物质的生产除了小鼠等有限的动物，还存在各种各样的课题。例如，无法提供可用作细胞融合所用的融合伴侣的细胞是小鼠以外的动物的细胞融合技术的重要课题之一。本发明人等发现，通过使特定的细胞融合，可获得作为融合伴侣有用的细胞。本发明人等所建立的融合伴侣细胞通过与小鼠以外的细胞融合，形成稳定的杂交瘤。而且确认了如此获得的杂交瘤在克隆期间也稳定地维持其表型(phenotype)，并且作为物质生产细胞也是有用的，进而完成了本发明。另外，还明确了通过本发明的杂交瘤，能够产生特异性地识别抗原的抗体。 

即，本发明涉及以下的融合伴侣细胞以及该融合伴侣细胞与物质生产细胞的杂交瘤。或者，本发明涉及这些细胞的制造方法以及利用杂交瘤的 物质的制造方法。 

一种融合伴侣细胞，其能够通过将以下的细胞(a)和(b)融合而获得， 

(a)来源于第1动物种的骨髓瘤细胞； 

(b)来源于第2动物种、且在细胞周期中含有Extra-S期的白血病细胞。