[发明专利]PPD用于佐剂化核酸疫苗的用途

说明书

本发明提供了核酸疫苗的新的佐剂，具体地，本发明提供了核酸疫苗， 其包含PPD或者与PPD联合施用。本发明还提供了提高核酸疫苗的治疗 功效的方法。

更具体地，本发明提供了PPD在生产核酸疫苗组合物的用途，用于 增强针对该核酸疫苗编码的特定抗原的免疫应答的目的。提供了疫苗组合 物、包含单独的核酸组合物和用于单独施用的包含PPD的组合物的药盒， 生产所述疫苗和药盒的方法，和用本发明的疫苗组合物治疗个体的方法。

多年来，疫苗接种技术基本上在于向动物中引入抗原(例如，蛋白质、 被杀灭或减毒的病毒)以便引起针对感染性生物的免疫应答。自从上世纪 80年代末期以来，已经出现了新的疫苗接种技术，其在于向动物中引入包 含编码抗原的核酸序列的载体。例如，编码狂犬病糖蛋白的活的痘苗病毒 已经被成功地用于清除西欧国家中的陆地狂犬病(Cliquet等人，Dev Biol (Basel).，2004，119，185-204)。核酸免疫的主要优点是可以诱导细胞(包括 CD4+和CD8+T细胞)和体液免疫应答，因为所编码的抗原通过内源和外 源途径被加工，肽表位通过主要组织相容性复合体(MHC)I类和II类复 合体呈递(Haupt等人，Exp Biol Med(Maywood)，2002，227，227-37)。

CTL应答的有效产生已经为通过核酸接种预防性或治疗性治疗癌症 铺平了道路。许多肿瘤细胞表达被称作TAA(肿瘤相关抗原)的特定抗原， 但是这些抗原不能被免疫系统充分识别，所述免疫系统被肿瘤外周的因子 下调。用编码TAA的核酸接种患者导致TAA在如下环境中的表达，所述 环境中，免疫系统是完全有效的并且产生特别针对肿瘤细胞的免疫应答。

对于每种治疗，总是需要提高核酸接种的功效。因此，定量提高免疫 应答或者改变对疾病适应症最有效的应答类型的方法可以是有用的。

然而，适于核酸接种的佐剂的鉴定不是直接的，因为针对常规疫苗或 核酸疫苗的免疫应答中相关的机理不是相同的。例如，申请人已经发现常 规疫苗的有效佐剂如BCG、montanide、levimazole或氯喹不能增加针对 核酸编码的抗原的免疫应答。

PPD(纯化的蛋白质衍生物)是从结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)提取的化合物的混合物。PPD被用作检测结核菌素反应性的 试验。PPD的皮内注射后，特征为增大的肿块的迟发型超敏反应的产生是 结核感染的病征。

PPD作为典型抗原载体的用途已经在现有技术中公开。例如，Perraut 等人(Clin.Exp.Immunol.，1993，93，382-6)描述了包含缀合到PPD的合成 的疟疾肽的疫苗。Ohno等人(US20060008478)公开了包含PPD和抗原的复 合体，其中这两种组分是共同沉淀物。整个现有技术公开了PPD和抗原的 同时注射。

申请人已经发现PPD是核酸疫苗的非常有效的佐剂并且更具体地涉 及使用重组病毒作为载体的核酸疫苗。该发现尤其令人惊奇，因为认为在 病毒表面存在的或者在病毒感染期间表达的多种病毒抗原足够作为针对所 述抗原的免疫应答的佐剂(J Immunol.，2005，175，599-606)。

发明概述

根据本发明的一个实施方案，提供了包含(i)PPD和(ii)编码抗原的核 酸序列的疫苗。

另一方面，本发明提供了药盒，其包含(i)PPD，和(ii)编码抗原的 核酸序列。

另一方面，本发明提供了增加对抗原的免疫应答的方法，所述方法包 括顺序或同时施用编码抗原和PPD的核酸。

在另一实施方案中，提供了PPD在生产药物中的用途，所述药物用 于增强对核酸序列编码的抗原的免疫应答，所述核酸序列与所述衍生物顺 序或者同时施用。

在另一实施方案中，本发明提供了包含PPD衍生物的药物组合物， 其用于增强对核酸序列编码的抗原的免疫应答。

在另一实施方案中，本发明提供了在哺乳动物中产生针对疾病状态的 免疫应答的方法，包括对所述哺乳动物施用编码与所述疾病状态有关的抗 原肽的核酸序列；额外对所述哺乳动物施用PPD以引起所述免疫应答。

还提供了增强哺乳动物对免疫原的免疫应答的方法，包括对所述哺乳 动物施用编码所述免疫原的核酸序列，额外对所述哺乳动物以有效增强所 述免疫应答的量施用PPD的步骤。

发明详述