[发明专利]使用基于UV光的DNA成像细胞术来检测和/或诊断癌症的体外方法

说明书

发明主题

本发明涉及通过测量细胞核核酸的UV吸收在体外确定人或动物细胞 的细胞核内的细胞核核酸的量的方法。

本发明还涉及基于细胞核核酸的UV吸收的体外检测生物样品中的癌 细胞的方法。

本发明进一步涉及基于细胞核核酸的UV吸收的诊断和/或预测人或动 物对象体内癌症的体外方法。

发明背景

癌症的早期检测是治疗癌症患者的关键因素。有各种在生物样品中检测 癌细胞，并从而诊断已存在的癌症或至少估计未来癌症发展的可能性的可能 的选择。这些不同的方法包括癌组织的物理检验、癌细胞的形态特征检测、 细胞结构例如膜和细胞核的免疫组化染色及特征鉴定、测量肿瘤特异因子的 表达等等。

检测癌细胞的一种可能的选择是所谓的DNA细胞术(DNA cytometry)， 其测量细胞核DNA的量以检测与正常DNA含量的偏离。假设如果一个细 胞(作为突变事件的后果)含有比已知标准(已知为非癌性的，即“健康的”或 “正常的”类型)更少或更多的DNA，那么DNA含量上的这种偏离可以提示 重要的染色体重排及正在进行的癌症发展。

因此在癌症诊断范围，在科研和临床应用中，通过核酸特异性染色对细 胞核DNA进行量化正在越来越多地进入实际应用中。

通过流式或成像细胞术对细胞核DNA含量进行测量特别基于如下假 设：(i)结合至DNA的染料的量正比于存在的DNA的量，和(ii)从染料通 过发射、吸收或透射产生的光信号正比于染料的量。

典型地用于通过DNA成像细胞术(DNA image cytometry)测量细胞核 DNA的一种DNA特异性染色方法是一种基于酸的反应，根据Feulgen和 Rossenbeck命名，通常简单地称为福尔根反应(Feulgen reaction)。事实上所 述福尔根反应是一种生色反应，其中DNA被酸水解产生具有游离醛基的不 含嘌呤的DNA(即所谓脱嘌呤核酸(apurinic acid，APA))。这些物质之后与含 有共价结合至所述游离醛基的染料的希夫试剂(schiffs reagent)反应。

虽然所述福尔根反应对于DNA具有特异性，但是其具有多种缺点。其 非常耗费时间，并且是一种复杂精细的反应，需要非常小心地控制并验证以 获得可重复的和有意义的结果。普遍用于移除嘌呤碱基的HCl将APA水解 为较小片段导致一个问题。APA分子的片段化导致这些片段从细胞核中移 除并因此导致丢失可染色的DNA物质。

因此，本领域中已经进行了尝试以基于形态特征鉴定、免疫组化染色和 DNA染色的组合可靠地检测癌细胞并诊断癌症。

US 2004/0197839 A1公开了同时使用两种不同类型的染色以鉴别癌细 胞，其中一种染色例如检测形态特征，而第二种(免疫学)染色例如测量一种 肿瘤特异性标记的表达。

但是，仍然需要给出测量细胞核DNA的量并检测癌细胞和癌症的可靠、 迅速及有效的途径的方法。

发明目的和简述

本发明的一个目的是提供用于确定细胞的细胞核内的核酸的量的方法。 这些核酸可以是双链的，例如DNA。

本发明的另一个目的是提供检测待测生物样品中癌细胞的存在的方法。

本发明一个进一步的目的是提供使得能够诊断人或动物对象体内癌症 的存在和/或癌症可能发生的方法。

为了实现上述目的，提供了独立权利要求中限定的方法。本发明一些优 选的实施方案特别在从属权利要求中限定。

根据本发明的一个实施方案，提供了体外确定至少一个生物样品中存在 的至少一个细胞中的细胞核核酸例如细胞核DNA的量的方法，其中所述方 法包括如下步骤：

a)体外确定所述细胞内细胞核的位置和/或尺寸，

b)体外确定a)中确定的细胞核的边界内的UV吸收。

在一个示例性实施方案中，所述细胞核的位置和/或尺寸可以通过使用 UV光和/或相差显微术在所述至少一个细胞中(粗略)确定。如果在步骤a)中 使用UV光，应当优选地使用波长在大约240nm和大约280nm之间的UV 光。特别优选的是波长例如为大约250nm、255nm或260nm。