[发明专利]免疫抑制药物的同质双重受体凝集测定法

权利要求书

1.测定样品中免疫抑制药物的存在或量的测定方法，包括以下步骤：

提供样品；

将该样品与第一受体和第二受体混合形成悬浮液，其中所述第一和第二受体与检测颗粒结合，且每一个所述第一和第二受体特异性结合于所述药物上分离的结合位点，其中药物的存在导致检测颗粒凝集；

直接检测或测定所述悬浮液中颗粒凝集的量；且

将颗粒凝集的量与样品中免疫抑制药物的存在或量相关联。

2.权利要求1的方法，其中免疫抑制药物选自环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素和依维莫司，且所述第一受体是亲免素或其结合片段。

3.权利要求1的方法，其中检测颗粒选自微粒和纳米壳。

4.权利要求1的方法，其中

免疫抑制药物为雷帕霉素或依维莫司；

第一受体包含FK506结合蛋白(FKBP)；且

第二受体包含雷帕霉素靶(TOR)蛋白。

5.权利要求4的方法，其中FKBP包含FKBP12或FKBP25的其中之一，且第二受体选自mTOR、mTOR的FKBP结合域、yTOR1、yTOR1的FKBP结合域、yTOR2和yTOR2的FKBP结合域。

6.权利要求1的方法，其中

免疫抑制药物为他克莫司；

第一受体包含FK506结合蛋白(FKBP)；且

第二受体包含钙调神经磷酸酶或其结合片段。

7.权利要求6的方法，其中钙调神经磷酸酶上结合有钙调节蛋白和钙离子。

8.权利要求1的方法，其中

免疫抑制药物是环孢菌素；

第一受体包含亲环蛋白；且

第二受体包含钙调神经磷酸酶。

9.权利要求8的方法，其中钙调神经磷酸酶上结合有钙调节蛋白和钙离子。

10.权利要求3的方法，其中样品为施用了至少一种免疫抑制药物的患者的血样。

11.权利要求10的方法，其中血样的处理先于所述混合步骤。

12.权利要求3的方法，其中检测颗粒是纳米壳。

13.权利要求3的方法，其中检测颗粒通过生物素-抗生蛋白链菌素或生物素-亲和素连键与所述第一和第二受体结合。

14.权利要求3的方法，其中检测颗粒直接或间接地通过接头与所述第一和第二受体共价结合。

15.权利要求14的方法，其中接头包含第一受体的抗体和第二受体的抗体。

16.权利要求13的方法，其中第一和第二受体为包含生物素分子附着位点的重组融合蛋白。

17.权利要求16的方法，其中附着位点包含生物素化的信号序列。

18.权利要求17的方法，其中融合蛋白与生物素连接酶共表达或在生物素连接酶的存在下表达，所述生物素连接酶催化生物素分子共价加合于信号序列中的残基上。

19.权利要求18的方法，其中生物素连接酶包含Avi标签且残基为赖氨酸。

20.权利要求17的方法，其中融合蛋白的一个融合配偶体是具有羧基端和氨基端的重组受体蛋白，且一个融合配偶体包含生物素化信号序列，此外，其中当第一受体的附着位点在羧基端时，则第二受体的附着位点在氨基端或在羧基端。

21.测定样品中免疫抑制药物的试剂，所述试剂包含

第一药物结合复合物，包含与第一检测颗粒结合的第一受体；

第二药物结合复合物，包含选自以下的结合部分：结合于检测颗粒的第二受体，结合于第二检测颗粒的免疫抑制药物特异性抗体，以及与第二受体复合的第二受体特异性抗体，其中每种药物结合复合物特异性结合于所述免疫抑制药物上分离的结合位点。

22.权利要求21的试剂，其中结合部分为结合于检测颗粒的第二受体。

23.权利要求22的试剂，其中待测定的免疫抑制药物是雷帕霉素，所述第一药物结合复合物包含FK506结合蛋白，且所述第二药物结合复合物包含雷帕霉素靶(TOR)蛋白。