[发明专利]检测阿尔茨海默病的步骤和方法

说明书

本申请涉及可用于检测哺乳动物尤其是人类中阿尔茨海默病的方法和组合物。它特别描述了阿尔茨海默病的血清标记物及其在诊断步骤中的用途。它还涉及可用于实施这些方法的工具和/或试剂盒(试剂，探针，引物，抗体，芯片，细胞等等)及其制品和用途。本发明可用于包括在该病早期阶段检测哺乳动物中阿尔茨海默病的存在或者进展。 

阿尔茨海默病是痴呆的主要原因并且是最常见的神经退行性疾病。这种疾病，实质上是进行性的，其特征在于记忆丧失以及语言技能、方向感和判断力的退化。所述症状的特性经常与老年的生理毛病混淆，它们的严重性以及它们在何种年龄出现因人而异。这导致很难在该病的早期阶段确诊。 

对患有该病患者的脑部检查显示海马区(记忆的重要中枢)和大脑皮层(涉及推理、语言和记忆)中神经元的丢失。胆碱能神经元尤其受到这种耗竭的影响。 

在阿尔茨海默病患者脑部观察到的另一主要异常是胞内和胞外蛋白聚集物的积聚。胞内神经原纤维tau蛋白缠结显示与痴呆程度密切相关。由淀粉状蛋白β肽的胞内和胞外聚集形成的衰老斑构成神经元和胶质细胞改变区域的特征。 

但值得注意的是这些聚集区域不对应于突触耗竭(déplétion en synapses)部位，所述突触耗竭是认知功能减退的特征。 

对遗传类型进行遗传研究已经显示了与该病发展有关的4个基因：APP(淀粉状前体蛋白)，早老蛋白1和2(PS1和PS2)以及脱脂载脂蛋白E(ApoE)。尽管这些基因中每一个中的突变或者多态性都将导致淀粉状蛋白β肽的生成增加，但对控制突触和神经元丢失的机制了解得仍然很少。因此在这点上，似乎同时存在与多种现象有关的数种假设和机制： 

1)涉及神经元和胶质细胞的纯粹脑现象： 

-氧化应激，其可能特别由淀粉状蛋白β肽诱导并经过胆固醇 代谢调节； 

-钙通量和兴奋毒性的变化； 

2)炎症和免疫反应现象； 

3)性激素的变化； 

4)甲状腺功能减退和胰岛素信号调节缺陷。 

因此，阿尔茨海默病的特征在于各种综合系统的变化，所述综合系统调节稳态并且攻击某些神经元，导致与免疫系统有关的炎症反应和内分泌调节的变化。后者反过来对其他神经元的活性(activité)和存活(viabilité)以及免疫功能产生影响，这类级联反应不仅在神经退行而且在阿尔茨海默病进展中的激素调节和免疫应答中起作用。 

目前还没有能够用于诊断阿尔茨海默病尤其是该病进展不同阶段的该病有效和特异特征序列(signature)。有效诊断试验的提供尤其是早期试验将使患者在疾病发生时接受护理，因此可以从更有效和更合适的治疗中受益，所述治疗尤其是最优条件下的乙酰胆碱酯酶抑制剂诸如他克林(tacrine)、多奈哌齐(donepezil)和利斯的明(rivastigmine)。 

本发明满足这种需要。本发明特别描述了阿尔茨海默病血清标记物的鉴定，允许开发出该病的存在、阶段或者患病风险的有效预测诊断法。因此本发明描述了在阿尔茨海默病患者血液中特异性和优先表达的分子特征序列的鉴定，所述分子特征序列尤其源于可变剪接。以一种特别出乎意料的方式，本申请证明了阿尔茨海默病患者的血液细胞中存在体内钟调节异常以及涉及吞噬和/或氧化应激的分子信号途径调节异常。因此本发明第一次提供了诊断、预测和/或监测阿尔茨海默病进展的工具和方法，其基于测量受试者血液中一或多个基因的表达，所述基因选自根据昼夜节律调节的基因以及参与调节吞噬或者氧化应激的基因。这类基因表达调节异常的存在能够确认阿尔茨海默病的风险或者易感性，或者证实该病在受试者中的存在。 

因此本发明的一个目的在于(体外(in vitro)或者离体(ex vivo))检测哺乳动物中阿尔茨海默病的存在或者患病风险的方法，包括在哺乳动物生物学样品优选在血液样品(衍生物)中检测一或多种基因或者RNA的变化，所述基因或者RNA选自根据昼夜节律调节的基因以及参与调节吞噬或者氧 化应激的基因，这类变化的存在是所述哺乳动物中阿尔茨海默病存在或者患病风险的指征。 

本发明的另一个目的涉及评估或者监测阿尔茨海默病治疗效果的方法，包括在治疗期间测量一种基因或者优选数种基因表达的步骤，所述基因选自根据昼夜节律调节的基因以及参与调节吞噬或者氧化应激的基因，并将测量得到的表达与治疗前期测定的表达进行比较。