[发明专利]预防和/或逆转新发作自身免疫糖尿病的基于微球的组合物

说明书

发明描述

本申请要求2006年8月4日提交的美国临时申请No.60/835,742 和2006年11月8日提交的美国临时申请No.60/864,914的优先权。上 述各申请的全部内容在此引入作为参考。

发明背景

总的来说，本公开涉及在NOD小鼠中预防和/或逆转自身免疫糖 尿病病症的反义方法。这包括通过注射微球投送AS-寡核苷酸以获得引 起负调节活性的治疗效果，具体是在非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠模 型中。微球使用完全水性的条件制造，该微球中结合有一种或多种反 义(AS)寡核苷酸。

微粒、微球和微囊是固体或半固体的颗粒，其直径小于1毫米， 也可以小于100微米，它们可以由各种不同的材料形成，包括合成聚 合物、蛋白和多糖。微球已经被用于许多不同的应用中，主要是分离、 诊断和药物投送。

有许多不同的技术可用于从合成聚合物、天然聚合物、蛋白和多 糖制造这些颗粒，包括相分离、溶剂蒸发、乳化和喷雾干燥。一般来 说，聚合物形成这些微球的支撑结构，而目标药物结合在聚合物结构 中。用于形成微球的示例性聚合物包括在Ruiz等的美国专利No. 5,213,812、Reid等的美国专利No.5,417,986、Tice等的美国专利No. 4,530,840、Tice等的美国专利No.4,897,268、Tice等的美国专利No. 5,075,109、Singh等的美国专利No.5,102,872、Boyes等的美国专利 No.5,384,133、Tice等的美国专利No.5,360,610、以及南方研究所 (Southern Research Institute)的欧洲专利申请公布No.248,531中描述 的乳酸和乙醇酸的均聚物或共聚物(PLGA)；在Illum的美国专利No. 4,904,479中描述的嵌段共聚物例如Tetronic908和泊洛沙姆 (poloxamer)407；以及在Cohen等的美国专利No.5,149,543中描述 的聚磷腈。使用例如这些聚合物生产的微球表现出荷载效率差，通常 仅能在聚合物结构中结合少量百分比的目标药物。因此，为了获得疗 效，通常必须施用相当大量的这些类型的微球。此外，这些聚合物一 般是疏水性的，对目标药物的溶解有负性影响。在这种情况下使用的 典型聚合物包括聚乳酸乙醇酸(PLGA)。

医疗团体的目标是将核酸投送到动物细胞中以治疗各种疾病，包 括糖尿病。在许多方法中，通过加入转染剂，能够相对有效地将核酸 投送到培养细胞中(体外)。此外，在体内，当给动物投送核酸时， 内源核酸酶的存在将导致核酸高速降解。

除了保护核酸免受核酸酶消化之外，核酸投送载体还必需表现出 低毒性，必须被细胞有效摄取，并且具有定义明确的、容易制造的配 方。临床试验中显示，用于投送的病毒载体在体内能导致严重的不利、 甚至是致命的免疫应答。此外，这种方法有可能在体内有致突变效应。 通过将核酸复合在不同配方的脂质复合物(例如脂质体或阳离子脂质 复合物)中进行投送，可能具有有毒的效应。核酸与各种聚合物或与 肽的复合物显示出不一致的结果，并且这些配方的毒性还没有解决。 核酸还已经被包裹在聚合物基质中进行投送，但是在这些情况下颗粒 的粒度范围广，并且治疗性应用的有效性还没有被证实。这些早先的 方法能产生与这里所希望的目标相反的效果，包括免疫系统的刺激。 例如，当PLGA被掺入到颗粒中时，PLGA的存在刺激了免疫系统。

因此，对于解决核酸投送中的问题存在着需求，对于微球的开发 和制造微球的新方法有正在发展的需求。关于微球的详细情况，特别 是关于它们的制备和性质的详细情况，可以在Scott等的美国专利No. 6,458,387，Woiszwillo等的美国专利No.6,268,053、No.6,090,925、No. 5,981,719和No.5,599,719，Woiszwillo的美国专利No.5,578,709以及 Brown等的美国申请公布No.2006/0024240中找到。这些以及所有在 本文中指明的参考文献在此引为参考。

发明简述