[发明专利]光学检测装置的性能确认方法及其使用的标准试剂

说明书

技术领域

本发明涉及对光学检测装置确认试样的光学信号的检测以 及上述试样的温度控制是否可以正常进行这些性能的方法、及 该方法所使用的标准试剂。

背景技术

近年来，作为检测基因的多态性、点突变等的新的检测方 法，分析核酸的融解温度(Tm：melting temperature)的方法正 在实用化。该分析方法例如通过上述核酸的融解曲线的分析来 进行，因此也被称为融解曲线分析或者Tm分析。

一般情况下，用以下方式来定义Tm值。持续加热包含双链 核酸的溶液，则260nm处的吸光度将上升。这是因为位于双链 核酸的双链之间的氢键通过加热而解开，并解链为单链核酸(核 酸的融解)。并且，所有的双链核酸解链成单链DNA时，其吸 光度显示为加热开始时的吸光度(仅双链核酸的吸光度)的约 1.5倍左右，据此可判断为融解完毕。根据这种现象，融解温度 Tm(℃)一般情况下被定义为吸光度到达吸光度全部上升量的 50％时的温度。

通过利用核酸的该特性，例如，如下操作可以检测目标位 点的多态性、突变等。也就是说，首先，使用与含有突变型的 目标位点的目标核酸序列互补的突变型检测用探针、使作为分 析对象的单链核酸和上述探针形成双链核酸，对所形成的双链 核酸进行加热处理，并测定伴随温度上升的上述双链核酸显示 解链(融解)的信号。而且由测得的信号值的行为来确定Tm值、 由所确定的Tm值来判断目标位点有无突变的方法(参照非专利 文献1和专利文献1)。双链核酸的同源性越高则Tm值也越高， 双链核酸的同源性越低则Tm值也越低。因此，分别对包括突变 型的目标位点的目标核酸序列和与其100％互补的突变型检测 用探针形成的双链核酸、以及上述目标位点为野生型的核酸序 列和上述突变型检测用探针形成的双链核酸，预先求出作为评 价标准的Tm值。如前面所述，因同源性越高Tm值也越高，所 以前者、即目标位点为突变型时的Tm值(以下、也称为Tm_m值) 相对较高，后者、即目标位点为野生型时的Tm值(以下、“Tm_w值”)则相对较低。而且，对由作为分析对象的单链核酸和上述 突变型检测用探针所形成的双链核酸，如上所述地进行信号测 定，例如，从作成的融解曲线来检测信号变化的峰值，显示该 峰值的温度、即Tm值如果与预先求得的Tm_m值为同等程度，则 单链核酸和上述探针为100％匹配，即，作为分析对象的核酸的 上述目标位点的多态性可判断为突变型。另一方面，如果显示 上述峰值的Tm值比预先求得的Tm_m值低、与Tm_w值为同等程度 时，则单链核酸和上述探针的有一个碱基错判，作为分析对象 的核酸的上述目标位点的多态性可判断为野生型。另外，对于 多态性为纯合性还是杂合性也可进行判断。也就是说，对一对 等位基因进行分析时，在融解曲线在Tm_m值附近和Tm_w值附近 的双处存在峰的情况下，可判断为杂合性；另一方面，仅在Tm_m值附近存在峰的情况下，可判断为突变型的纯合性，仅在Tm_w值附近存在峰的情况下，可判断为野生型的纯合性。

在该分析中，广泛使用例如使用用荧光物质标记过的探针 作为上述探针，测定上述荧光物质的荧光作为信号的方法。在 这种利用Tm分析的检测方法中，通常使用具备用于检测试样的 光学信号的检测单元和用于控制上述试样的温度的温度控制单 元的光学检测装置，该装置以各种商品形式销售。

如前所述，在Tm分析中，因为通过测定伴随温度变化的光 学信号的变化来确定Tm值，所以上述光学检测装置是否能正确 控制上述试样的温度、或能否正常检测上述试样的光学信号这 两点极为重要。因此，为了维持上述光学检测装置分析结果的 可靠性，必须对光学信号的检测性能和温度控制性能二者进行 确认。因此，对于光学信号的检测来说，能否正确测定光学信 号可如下进行确认：准备包含已知浓度的已知荧光物质，对上 述溶液在规定的温度条件下测定上述荧光染料的信号强度(荧 光强度)来判断是否正常。另一方面，对于试样的温度控制来 说，能否正确控制上述试样温度可如下进行确认：将试样放置 在上述光学检测装置的规定位置(以下称“试样放置部”)，通过 实际测定上述试样的温度，来判断上述装置的温度控制单元能 否正确控制温度。